Introdução: O dermatófito Trichophyton rubrum tem particular interesse em micologia clínica por ser um fungo exclusivamente antropofílico cuja incidência tem vindo a aumentar nos países industrializados. Uma identificação correcta revela-se de maior importância quer ao nível da administração adequada da medicação ao paciente, quer ao nível da epidemiologia e/ou da taxonomia. A identificação dos dermatófitos é complexa requerendo uma abordagem polifásica. A nova técnica de identificação baseada no Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionisation Time Of Fight Intact Cell Mass Spectrometry (MALDI-TOF ICMS) começa a dar os primeiros passos como uma alternativa aos métodos moleculares. O objectivo do presente trabalho foi a identificação de isolados clínicos de T. rubrum baseada numa abordagem polifásica, utilizando métodos morfológicos, moleculares e espectrais.
Material e métodos:
Foram analisados 20 isolados de T. rubrum provenientes de lesões superficiais da pele e unhas. A inoculação dos fragmentos foi feita em meio de cultura suplementado com antibóticos. As placas foram incubadas durante 7 a 10 dias a 25 ºC, e as colónias foram analisadas macro- e microscopicamente. Uma porção de cada colónia foi utilizada para extracção do ADN e amplificação de um fragmento específico para T. rubrum por PCR, para validação molecular. Outra porção foi retirada para análise de MALDI-TOF ICMS. Fez-se uma comparação entre os espectros obtidos por análise e o superspectrum fornecido pela base de dados do software SARAMISTM. Esta comparação entre espectros permitiu validar a identificação feita por esta técnica.
Discussão dos resultados:
A identificação de isolados de T. rubrum baseada numa abordagem polifásica consistiu na observação das características morfológicas, na validação da identificação através do uso de marcadores genéticos e, finalmente, na utilização do MALDI-TOF ICMS para confirmação da identificação dos isolados. A observação morfológica foi consistente com a identificação do dermatófito. A obtenção de um amplicon específico para T. rubrum confirmou a identificação anterior. A identificação por MALDI-TOF ICMS foi 100% consistente com a identificação anterior.
Conclusão:
Todos os isolados foram identificados de forma consistente e reprodutível pelo MALDI-TOF ICMS. A análise espectral provou ser um método rápido, cuja análise se realizou apenas em alguns minutos e sem recurso a reagentes caros ou procedimentos laboriosos.