DETECÇÃO DE PROTEINASES OBTIDAS DE ISOLADOS BACTERIANOS DA ILHA REI GEORGE, ANTÁRTICA.

Fabiano Araujo Pires (UFRJ); Claudia Masini D'ávila-levy (Fiocruz); Thiago Lazari Machado (Fiocruz); Hugo Emiliano de Jesus (UFRJ); Raquel Peixoto (UFRJ); Alexandre Soares Rosado (UFRJ); Marta Helena Branquinha (UFRJ)

A Antártica é o continente mais frio e seco da Terra, com temperaturas médias entra -30 e -65^oC, precipitação média anual entre 30 e 70mm, sendo considerado um grande deserto. Esse ambiente exerce grande pressão seletiva que determina a sobrevivência ou não dos organismos ou uma eficiente adaptação, como ocorre  nos  psicrófilos, que desenvolvem uma série de adaptações em seus constituintes celulares, inclusive em seu arsenal enzimático. O mercado mundial de enzimas industriais movimenta cerca de 2 bilhões de dólares por ano e apesar do potencial indiscutível, os psicrófilos e seus produtos estão sendo subutilizados na biotecnologia. Neste trabalho, foram detectadas as proteinases psicrófilas de  isolados bacterianos da região antártica. As amostras foram obtidas através de coletas no continente antártico no verão de 2006/2007, isoladas e identificadas através do sequenciamento genético pelo RNAr 16S e testes bioquímicos. As proteases foram detectadas nos  extratos dos sobrenadantes do cultivo de Algoriphagus antarcticus e Bacillus spp., que foram concentrados em membrana de diálise contra polietilenoglicol overnight a 4^oC. A atividade das proteinases (20ug de proteína/slot) foi determinada empregando-se a técnica de SDS-PAGE (10%) contendo gelatina co-polimerizada (0,1%). A eletroforese foi realizada a 120V, 4^oC por 90 minutos, e os géis incubados em Triton X-100 (2,5%) por 1h, lavados em água destilada e incubados por 18h, para avaliação do efeito do pH em: tampão acetato de sódio 0,05M (pH 3,6); tampão fosfato 0,05M (pH 5,5); tampão fosfato 0,05M (pH 7,5); e em tampão glicina-NaOH 0,05M (pH 10) a 37^oC. A revelação das bandas proteolíticas foi obtida por coloração do gel com Coomassie Blue (0,2%) em metanol:ácido acético:água (50:10:40 v/v/v). Para determinação da classe enzimática os géis foram incubados com os seguintes inibidores proteolíticos: pepstatina 10mM; E-64 10uM; EDTA 5mM; 1-10 fenantrolina 20mM e PMSF 1mM. Os resultados revelaram que as amostras apresentam um perfil de proteinases complexo, sendo as serino- e metalo-proteinases predominantes na amostra de Bacillus spp., e as serino-proteinases em A. antarcticus, reforçando assim, a necessidade de futuros estudos para avaliação do potencial biotecnológico  dessas proteinases.