DESENVOLVIMENTO DE PEPTIDEOS RECOMBINANTES DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS POR PHAGE DISPLAY

Sintia Silva de Almeida (UFMG); Núbia Seyffert (UFMG); Carlos Roberto Prudêncio (UFU); Fabiana de Almeida Araújo dos Santos (UFU); Vívian D'afonseca da Silva de Resende (UFMG); Siomar de Castro Soares (UFMG); Dayana Ribeiro (UFMG); Anderson Miyoshi (UFMG); Luiz Ricardo Goulart (UFU); Vasco Ariston de Carvalho Azevedo (UFMG)

A linfadenite caseosa (LC) é uma doença causada por Corynebacterium pseudotuberculosis, que acomete principalmente caprinos e ovinos. Esta enfermidade é responsável por perdas econômicas significativas relacionadas à produtividade dos animais infectados. Atualmente não existe um diagnóstico satisfatório para LC. O diagnóstico ideal para prevenir a proliferação da enfermidade em um rebanho deveria ser sensível e específico o suficiente para detecção da infecção em fase inicial. Para tal, foi utilizado no presente trabalho, a ferramenta Phage display a qual seleciona peptídeos, utilizando bacteriófagos geneticamente modificados para expressar aleatoriamente seqüências de peptídeos na sua superfície. Estas bibliotecas têm sido utilizadas com sucesso para numerosas aplicações, como mapeamento e mimetismo de antígenos reconhecidos por anticorpos,  desenvolvimento de vacinas, e em testes de imunogenicidade. Este trabalho teve como objetivo selecionar e identificar por Phage display peptídeos ligantes específicos para proteínas secretadas e/ou excretadas e totais de C. pseudotuberculosis 1002. Foi utilizada uma biblioteca comercial de 12 peptídeos lineares (Ph.D.™-12 Biolabs) e após três ciclos de seleção foram obtidos 121 peptídeos, sendo que 82 são seqüências distintas. Foram realizadas análises in silico dos peptídeos contra o proteoma predito de C. pseudotuberculosis 1002, onde apresentaram similaridade com proteínas envolvidas com sinalização, nutrição, metabolismo, patogênese bacteriana e fatores de transcrição entre outras. A reatividade e especificidade dos clones isolados foram testadas por ELISA, sendo reativos contra IgGs  de C. pseudotuberculosis 1002. Ensaios de ELISA, dot-immunoblotting, Western blot, ainda estão sendo realizados para validação, o que pode levar à descoberta de novos alvos biológicos como potenciais marcadores clínicos. A identificação de novos antígenos ou genes específicos de C. pseudotuberculosis pode prover novos biomarcadores específicos potencialmente antigênicos para a obtenção de antígenos candidatos à vacina e diagnósticos subclínicos mais acurados para o controle e erradicação da LC.
Suporte Financeiro: CNPq, FAPEMIG.