A segunda geração de métodos que empregam a PCR, denominada PCR-tempo real (PCR-RT), vem ganhando aprovação para detecção de patógenos, inclusive os de origem alimentar. Estes métodos combinam as etapas de amplificação e detecção em uma única reação em tubo fechado, o que minimiza o risco de contaminação da amostra. A quantificação de patógenos em amostras de produtos alimentícios tem se tornado cada vez mais importante para que se possa estabelecer, de maneira segura e confiável, o risco daquele alimento em causar enfermidades transmitidas por alimentos. O objetivo do trabalho foi desenvolver um ensaio para quantificar Salmonella em amostras de alimentos-modelo.

2. Material e Métodos

Caldos de carne suína e de ave foram preparados, coletados em tubos estéreis e foram denominados alimento-modelo suíno e alimento-modelo ave. Alíquotas desses alimentos-modelo foram artificialmente contaminadas com população elevada (≈ 6 log UFC/mL) e baixa (≈ 2 log UFC/mL) de Salmonella Typhimurium DT 104, mantidas a 20 °C e a 8 °C e submetidas à quantificação do patógeno em diferentes tempos pós-inoculação. DNA bacteriano foi extraído, purificado e foi quantificado empregando-se um ensaio Salmonella-específico PCR-RT utilizando como alvo o gene tuf. Como controle empregou-se a enumeração de Salmonella por técnicas convencionais.

3. Resultados e Discussão

A quantificação de Salmonella por PCR-RT apresentou limite de detecção <1 log UFC_eq e eficiência de amplificação de 94%. Não se verificou diferença (p≥0,05) entre os métodos convencional e molecular tanto para populações elevadas como baixas em ambos os alimentos-modelo mantidos a 20 °C e para populações baixas mantidas a 8^oC. Entretanto, quando as amostras com populações elevadas foram mantidas a 8° C, os métodos se comportaram de maneira diferente (p<0,05).

4. Conclusão

O método PCR-RT empregando como alvo tuf, mostrou-se potencialmente eficiente, mas ainda precisa ser submetido a novas avaliações. Dentre as vantagens da PCR-RT destacam-se a rapidez para a realização dos ensaios, a elevada sensibilidade e a possibilidade de se trabalhar com volumes pequenos de amostra. A principal desvantagem do método é a detecção e a quantificação de DNA proveniente de células bacterianas mortas.

5. Agradecimentos

CAPES, CNPq e DAAD.