AVALIAÇÃO DO DIAGNÓSTICO MOLECULAR (RFLP-PCR) PARA IDENTIFICAÇÃO DE FUNGEMIAS EM ESPÉCIMES CLÍNICOS ISOLADOS DE PACIENTES ATENDIDOS NA FUNDAÇÃO DE MEDICINA TROPICAL DO AMAZONAS.

Mirlane Silva dos Santos (FMTAM); Ana Karla Lima Freire (FMTAM); Ivanete Lima Sampio (FMTAM); Ramodnil Moura Santos (UEA); João Vicente Braga de Souza (INPA)

Introdução: O diagnóstico molecular tem tornado-se cada vez mais acessível para a identificação, possibilitando um diagnóstico precoce, sensível e específico quando comparados com os métodos convencionais de fenotipagem. Objetivo: Avaliar a RFLP-PCR para identificação de linhagens fúngicas em espécimes clínicos. Metodologia: Foi selecionada uma linhagem de cada espécie de Candida albicans, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. glabrata, Complexo Cryptococcus neoformans var. neoformans e var. gatti, Histoplasma capsulatum, oriundas da micoteca da Fundação de Medicina Tropical do Amazonas. Foram reativadas em meio de cultura ágar sabouraud, seguida da extração do DNA que foi realizada com o kit comercial QIA amp DNA Blood and Tissue – Qiagen. O DNA extraído foi submetido à amplificação por PCR, desenhada para amplificar regiões do espaçamento interno do rDNA com os pares de primers ITS1/ITS4, ITS5/NL4 e Primer1/ Primer2. Após a PCR as amostras foram submetidas à digestão enzimática. Resultados: Todos os pares de primers mostraram-se adequados para a obtenção de produtos de PCR, amplificando todas as amostras submetidas à análise. Os produtos de PCR obtidos com o par de primers ITS1/ITS4 quando digeridos com as enzimas Hae III, Ddel e Bfal apresentaram 5, 6 e 4 perfis de RFLP, respectivamente, com no máximo 3 bandas por isolado. Os produtos de PCR obtidos com o par de primer ITS5/NL4 digeridos com as enzimas Hae III, Ddel e Bfal apresentaram 6, 7 e 3 perfis de RFLP, respectivamente, com até 5 bandas por isolado. Os produtos de PCR obtidos com o par de Primer 1/ Primer 2 e digeridos com as enzimas Hae III, Ddel e Bfal apresentaram 4, 3 e 3 perfis de RFLP, com respectivamente, com até 2 bandas por isolado. Conclusão: A combinação dos produtos de PCR obtidos com o par de primers ITS5 e NL4, seguida da digestão com a enzima Ddel foram capazes de produzir um perfil de RFLP para cada espécie estudada, permitindo assim a distinção entre elas.