LOCALIZAÇÃO DA CHAPERONE MDJ1 DE PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS EM MICÉLIO E FORMAS DE TRANSIÇÃO.

Ítala Bruna Zábulon Dourado (UNIFESP); Wagner Luiz Batista (UNIFESP); Rosana Puccia (UNIFESP)

Paracoccidioides brasiliensis é um fungo termo-dimórfico, cuja diferenciação celular no hospedeiro, dos conídeos infectantes provenientes da fase de micélio (25°C) para a forma patogênica leveduriforme (37°C) é essencial para o desenvolvimento da paracoccidioidomicose. Algumas modificações bioquímicas e fisiológicas do fungo impostas pelo ambiente no hospedeiro, tais como a expressão fase-específica de certas moléculas, podem estar diretamente relacionadas à virulência do microorganismo, bem como ao curso da infecção. Genes de P. brasiliensis homólogos àqueles que codificam duas proteínas mitocondriais de choque térmico foram caracterizados pelo nosso grupo: o PbLON, que codifica a proteinase Lon ATP-dependente, e o PbMDJ1, codificador da chaperone mitocondrial Mdj1. Além de responderem ao estresse térmico e oxidativo, esses genes possuem uma relação funcional em leveduras: a Mdj1, membro da família DnaJ, tem papel na digestão de proteínas desnaturadas pela Lon. Resultados prévios de nosso laboratório, utilizando microscopia eletrônica, confocal e anticorpos policlonais de coelho anti-PbMdj1 recombinante, demonstraram a PbMdj1 tanto na mitocôndria de leveduras do isolado Pb18, como em abundância na parede celular e região de brotamento. Além disso, houve um significante aumento na expressão dessa proteína em frações mitocondriais e de parede celular após estresse térmico. Foi o primeiro relato de uma DnaJ na superfície celular e sua função na parede celular é especulativa. Diante disto, visamos determinar, através de microscopia confocal, se a localização extramitocondrial da Mdj1 ocorre na fase miceliana e nas formas de transição do P. brasiliensis. Para tal, usamos culturas fúngicas tanto em meio líquido como de hifas de Pb18 cultivadas em microcultivos em meio YPD modificado a 21°C. As células foram marcadas com MitoTracker Red 580S, que evidencia mitocôndrias, e soro de coelho anti-PbMdj1. A técnica de microcultivo para observação em confocal necessitou de extensa padronização. Resultados preliminares apontam para a presença de Mdj1 na parede celular de hifas, todavia esses resultados não são definitivos. Por outro lado, foi possível obter marcação intracelular da Mdj1 de leveduras de Histoplasma capsulatum com anti-PbMdj1 recombinante. Resultados adicionais serão apresentados no painel.