IDENTIFICAÇÃO DE CONTAMINANTES BACTERIANOS NO PROCESSO DE MICROPROPAGAÇÃO DE CANA-DE-AÇÚCAR.

Cristiane Toledo (CanaVialis S.A.); Hamilton Jordão (CanaVialis S.A.); Fernanda Ferrari (CanaVialis S.A.); Walter Maccheroni (CanaVialis S.A.)

O Brasil ocupa atualmente cerca de 8,5 milhões de hectares com cana-de-açúcar nas regiões Nordeste e Centro-Sul. A safra 2008 produziu cerca de 570 milhões de toneladas de matéria-prima que resultaram em 32 milhões de toneladas açúcar e 26 milhões de litros de álcool. A produção in vitro de mudas de cana-de-açúcar por meio de técnicas de cultura de tecido é uma metodologia tradicional no setor sucro-alcooleiro no Brasil e no mundo que permite a produção em grande escala de mudas sadias. A contaminação dos meios de cultura sintéticos por microrganismos é o principal fator que ocasiona a perda de plantas neste processo e que pode chegar a 100%. Dentro deste contexto, os objetivos deste trabalho foram: i) isolar os contaminantes bacterianos mais freqüentes no processo de produção de mudas de cana-de-açúcar por cultura de tecidos e ii) identificar os gênero e/ou espécie destes contaminantes por meio do seqüenciamento de regiões pertencentes ao operon ribossomal bacteriano. Para isso, as principais bactérias contaminantes observadas nas etapas de micropropagação in vitro de cana-de-açúcar foram isoladas em meio de cultura LB (Luria-Bertani) pela técnica de esgotamento por estrias. Estas bactérias foram agrupadas inicialmente por meio de características morfológicas como cor e tamanho da colônia. Os grupos bacterianos mais freqüentes foram então utilizados para extração de DNA, amplificação das regiões de interesse (16S rDNA) e seqüenciamento. As seqüências obtidas foram comparadas, por meio da ferramenta BLAST, ao banco de dados Genbank (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/). As principais bactérias contaminantes foram identificadas dentro de grupos taxonômicos comumente relatados na literatura como microrganismos endofíticos em associação com outras plantas. O gênero mais freqüente observado neste trabalho foi Burkholderia, conhecida como uma bactéria que faz parte de microecossistemas de solos e possui diversas características, tais como: promoção de crescimento em plantas com a fixação biológica do nitrogênio e produção de fitormônios.