PADRONIZAÇÃO E DESENVOLVIMENTO DE TESTE IMUNOENZIMÁTICO PARA PESQUISA DE RESÍDUOS DE ENROFLOXACINA E CIPROFLOXACINA EM PRODUTOS ANIMAIS

Lília Spaleta Targa (IMTSP); Antonio Walter Ferreira (FMUSP)

Introdução: A possibilidade da presença de resíduos antimicrobianos em produtos de origem animal vem causando preocupação nos órgãos governamentais. Os antimicrobianos têm sido amplamente utilizados na avicultura, como terapêuticos e aditivos na ração ou na água. Porém, quando o produtor não respeita o tempo de carência estabelecido para cada fármaco, esses podem deixar resíduos, que quando ingeridos acima das doses permitidas por lei, podem causar danos ao ser humano. Baseando-se nessas premissas propomos a padronização de um teste imunoenzimático para detectar resíduos de enrofloxacina e ciprofloxacina em produtos de origem animal. Materiais e Métodos: Placas de poliestireno de fundo plano foram sensibilizadas com anticorpos monoclonais anti – enrofloxacina/ ciprofloxacina, diluído 1/1.000 em tampão PBS, pH 7, e incubadas “overnight” a 4º C. Após a sensibilização, as placas foram lavadas três vezes com PBS Tween 20 a 0,05% (PBS-Tw), bloqueadas com leite desnatado 5% e incubadas por duas horas a 37ºC. Após este período foi feito novo ciclo de lavagens e em seguida, os antibióticos Ciprofloxacina e Enrofloxacina foram diluídos a partir de 100 mg a 0,06 mg em solução PBS e adicionados às placas que foram novamente incubadas por uma hora a 37ºC. Novo ciclo de lavagens foi realizado e em seguida foi adicionado o segundo anticorpo, soro do coelho anti-antibiótico conjugado a peroxidase, diluído à 1/500 por uma hora a 37ºC. Novo ciclo de lavagem foi feito e após revelação e bloqueio de atividade enzimática as placas foram lidas em 450 nm. Discussão dos resultados: Foram detectadas concentrações inferiores a 0,06µg/ml de antibióticos, o que torna o reagente satisfatório para ser utilizado como referencial de detecção de resíduos. Pelos resultados obtidos podemos pensar na formatação de um reagente imunoenzimático para determinar concentrações míninas de resíduos de antibióticos. Conclusão: A associação de anticorpos monoclonais e policlonal permitiu a padronização do teste imunoenzimático para a detecção de resíduos de enrofloxacina em quantidades exigidas por lei. Com os reagentes produzidos “in house” é possível se pensar na formatação de um “kit”, a custos reduzidos, para ser utilizado pelos Órgãos de Fiscalização do Governo, com intuito de assegurar a qualidade dos alimentos destinados a população. Apoio Financeiro ANVISA/OPAS/OMS – FAPESP 07/59556-7