IMOBILIZAÇÃO DE INVERTASE DE LEVEDURAS DO GÊNERO SACCHAROMYCES CEREVISIAE EM CAULIM

Andréa Francisco dos Santos (UNESP ARARAQUARA); Caio Casale Aragon (UNESP); Julio César Vinueza Galárraga (UNESP ARARAQUARA); Daniela Parreira Marques (UNESP ARARAQUARA); Rubens Monti (UNESP ARARAQUARA)

A enzima invertase pode ser encontrada em fungos, bactérias, mamíferos e vegetais, sendo a principal fonte a levedura Saccharomyces cerevisiae. A invertase hidrolisa a sacarose liberando açúcar invertido, que é muito utilizado na fabricação de produtos de panificação, sorvetes, bebidas, balas, dentre outros. As enzimas podem atuar livres ou imobilizadas em um suporte sólido como o caulim, material formado por um grupo de silicatos hidratos de alumínio, principalmente caulinita e haloisita. O uso de enzimas imobilizadas em suportes sólidos propicia a reutilização da enzima, o aumento de sua estabilidade e, consequentemente, redução de custos. Os objetivos deste trabalho foram imobilizar a invertase de Saccharomyces cerevisiae em caulim e  verificar o produto da hidrólise da sacarose pelo derivado obtido. A enzima invertase foi obtida através da maceração do fermento de pão com éter e areia. A determinação dos parâmetros cinéticos foi feita a partir da atividade invertásica, utilizando sacarose 2% como substrato. A dosagem do açúcar redutor foi realizada pelo método do ácido 3,5^’-dinitrosalicílico proposto por  Miller, e o teor protéico foi determinado pelo método de Lowry modificado por Hartree. O extrato enzimático foi colocado em presença de caulim e o processo de imobilização foi acompanhado, determinando-se a atividade na suspensão e no sobrenadante. Os resultados mostraram que, após 1,5h de contato, mais de 50% da enzima presente no extrato ligou-se ao suporte. Após a filtração, o derivado foi lavado com tampão bórax pH 10 e, em seguida, com água Mili-Q. O derivado assim obtido apresentou excelente atividade. Frações do derivado foram ensaiados com sacarose 10% e verificou-se através da cromatografia ascendente em sílica-gel P-60 que foi possível hidrolisar mais que 90% da sacarose. Ao derivado caulim-invertase foi adicionado tampão de ruptura contendo SDS + b-ME e, após 3 minutos a 100⁰ C, foi centrifugado. O sobrenadante foi analisado por SDS-PAGE e os resultados mostraram que não ocorreu liberação da enzima. Mais estudos serão realizados para determinação da estabilidade térmica do derivado Caulim-invertase.