CARACTERIZAÇÃO GENOTÍPICA DE CHROMOBACTERIUM SP. POR MULTILOCUS SEQUENCE ANALYSIS (MLSA) E HIBRIDAÇÃO DNA-DNA

Cláudia Beatriz Afonso de Menezes (DRM/CPQBA); Daniele Bussioli Alves Corrêa (Lab. Bac. Vegetal); Mariana Ferreira (Lab. Bac. Vegetal); Suzete Aparecida Lanza Destéfano (Lab. Bac. Vegetal); Fabiana Fantinatti-garboggini (DRM/CPQBA)

A metodologia de Multilocus Sequence Analysis (MLSA) vem sendo considerada uma ferramenta importante no estudo taxonômico de procariotos, reforçando a inferência filogenética obtida por análise de sequências do gene RNA ribossomal 16S. Além disso, estudos têm demonstrado que a comparação das sequências de múltiplos genes (geralmente housekeeping genes) que codificam proteínas é útil para a delineação de espécies e que poderia substituir a análise de hibridação DNA-DNA, uma vez que esta técnica é bastante laboriosa e não permite a geração de banco de dados cumulativos. A avaliação da diversidade genética de 17 isolados de Chromobacterium sp. por MLSA e comparação dos resultados com hibridação DNA-DNA foi o objetivo deste trabalho. A análise de MLSA foi realizada com os genes conservados rpoA, recA, lepA, gyrB, fusA e 16S rRNA, individuais e concatenados. Os ensaios de hibridação DNA-DNA foram feitos para os isolados CBMAI 305, 310, 592, 594 e 596, utilizando como sondas as linhagens CBMAI 534^T e 310. As análises filogenéticas das sequências do gene RNA ribossomal 16S e por MLSA agruparam todos os isolados no gênero Chomobacterium, entretanto os isolados CBMAI 310, 589, 590, 592, 594, 596 e 599 são distantes filogeneticamente das espécies tipos C. violaceum e C. subtsugae. A hibridação DNA-DNA mostrou que os isolados CBMAI 310, 592, 594 e 596 não pertencem a espécie C. violaceum, apresentando valores de hibridação DNA-DNA com a linhagem CBMAI 534^T inferiores a 70%. A análise por MLSA apresentou boa resolução no estudo da diversidade genética de Chromobacterium sp., corroborando os resultados da análise de sequência do gene RNA ribossomal 16S e sugerindo a existência duas novas espécies para o gênero. Além disso, a técnica mostrou-se robusta para distinção entre espécies de Chromobacterium.