AN¨¢LISE DA EXPRESSÃO DOS GENES CRY1AB E CRY1AC DE BACILLUS THURINGIENSIS POR QPCR TEMPO REAL.

Camila Chiaradia Davolos (UNESP-FCAV); Jackson Antonio Marcondes de Souza (UNESP-FCAV); Ana Maria Guidelli Thuler (UNESP-FCAV); Odair Aparecido Fernandes (UNESP-FCAV); André Ballerini Horta (UNESP-FCAV); Eliane Cristina Cunha Alves (UNESP-FCAV); Manoel Victor Franco Lemos (UNESP-FCAV)

A técnica de PCR tempo real é uma opção bastante atraente no contexto do controle biológico de pragas, pois possibilita o monitoramento da quantificação da expressão de genes cry de B. thuringiensis e a associação desta expressão à mortalidade de larvas de pragas agrícolas. Sendo assim, a expressão dos genes cry1Ab e cry1Ac por qPCR (PCR quantitativo) tempo real foi realizada para 15 isolados e três linhagens padrão de B. thuringiensis com o objetivo de associar a taxa de expressão destes genes à mortalidade de larvas de duas populações de Spodoptera frugiperda, sendo uma de laboratório e outra proveniente de uma plantação de milho (população de campo). Para tanto o RNA total dos isolados e das linhagens padrão foram extraídos em dois diferentes tempos de cultivo e, em seguida, transformados em cDNA. As amostras de cDNA foram amplificadas com o fluoróforo TaqMan® por qPCR tempo real para o gene endógeno fabI e genes alvos cry1Ab e cry1Ac. Os valores Ct obtidos foram analisados no programa RQ Study pela equação 2^-ΔΔCt. A expressão do gene cry1Ab, não foi constatada em nenhum isolado nas condições analisadas, no entanto, foi detectada expressão para os dois padrões testados, sendo a taxa de expressão da linhagem var. tolworthi da ordem de 1,97 e da linhagem var. kurstaki HD1 de apenas 0,6. Para o gene cry1Ac todos os isolados apresentaram taxa de expressão em pelo menos um horário de isolamento, com variação de  -0,44 à 4,56 e para a linhagem var. kurstaki HD73 a taxa de expressão foi da ordem de 4,39 e para a var. kurstaki HD1 não foi detectado expressão deste gene nas condições testadas. Os resultados de expressão foram associados ao potencial de controle das larvas de S. frugiperda das duas populações testadas, sendo que os elevados níveis de expressão do gene cry1Ac foram associados diretamente a elevado potencial de controle da população de laboratório. Diante desses resultados, verificamos que o controle das larvas está diretamente ligado à taxa de expressão de genes cry1, e que apenas a detecção desse gene não é indicativo de que a utilização de um isolado que o contém resultará num controle eficiente da praga. Dessa forma ressaltamos a importância do estudo da expressão de genes cry para o controle de diferentes pragas, com o intuito de contornar possíveis resistências de insetos-praga às proteínas Cry com o advento das plantas transgênicas.