DIVERSIDADE DE ISOLADOS FITOPATOGÊNICOS E CLÍNICOS DE FUSARIUM VERTICILLIOIDES POR RFLP DA REGIÃO ITS DO RDNA

Susane Cavalcanti Chang (UFPE); Cristina Maria de Souza Motta Souza-motta (UFPE); Neiva Tinti de Oliveira Oliveira (UFPE)

Fusarium verticillioides é um parasita não obrigatório, patógeno de culturas importantes, como sorgo e milho, encontrado em todas as regiões do mundo, podendo também causar doenças em humanos e animais. Várias ferramentas moleculares têm sido usadas para analisar variabilidade intraespecífica em fungos. O presente estudo teve como objetivo verificar a eficiência da técnica de RFLP- ITS com as enzimas de restrição AluI, HaeIII, HinfI, MspI, PstI para a distinção de isolados clínicos (2,3,7,11,12,FM,9,6,FO,FS) de fitopatogênicos (1,4,5,16,10,13,14,15) de F. verticillioides. A amplificação da região ITS do rDNA, resultou em fragmentos de aproximadamente 600pb para todos os isolados. Alíquotas de 4 µL dos amplicons foram submetidos à digestão com cada enzima de restrição separadamente, de acordo com as instruções do fabricante. Fragmentos foram separados em gel de agarose a 1.4% (w/v), utilizando marcador de peso molecular 100-pb (Invitrogen). Para enzima AluI a digestão resultou em fragmentos de aproximadamente 150pb e 450pb para os isolados 1,4,5,10,15,2,3,7,12,FM,FS, e para os isolados 16,13,14,11,9,6,FO foram gerados fragmentos de 150pb e 380pb. A digestão com a enzima HaeIII resultou em fragmentos de 90pb, 180pb e 300pb para os isolados 1,4,5,10,15,2,3,7,12,FM, fragmentos de 90pb, 180pb e 380pb para os isolados 16,13,14,11,9,FO, fragmentos de 90pb,150pb e 380pb para o isolado 6 e fragmentos de 180pb e 280pb para o isolado FS. Para enzima HinfI a digestão resultou em fragmentos de 300pb para os isolados 1,4,5,15,2,3,7,11,12,FM, fragmentos de 100pb, 200pb e 300pb foram gerados para os isolados 16,10,13,14,9,6,FO e para o isolado FS o fragmento gerado foi de 280pb e 300pb. A digestão com a enzima MspI resultou em fragmentos de 120pb, 180pb e 280pb para os isolados 1,4,5,10,15,2,3,7,12,FM, fragmentos de 100pb e 500pb para os isolados 16,13,14,11,9,6,FO e fragmentos de 200pb e 400pb para o isolado FS. Por fim, para enzima PstI a digestão resultou em fragmentos de 150pb e 450pb para os isolados 1,4,5,10,15,2,3,7,12,FM e fragmentos de 500pb para os isolados 16,13,14,11,9,6,FO,FS. As enzimas utilizadas não foram eficientes para separar isolados clínicos de isolados fitopatogênicos de Fusarium verticillioides, e apenas as enzimas HaeIII,  HinfI e MspI distinguiram F. verticillioides de uma das espécies analisadas.