25º Congresso Brasileiro de Microbiologia
ResumoID:1186-1


Área: Micologia Médica ( Divisão B )

ANÁLISE E PURIFICAÇÃO DE PEPTIDOPOLISSACARÍDIOS DE CLADOSPORIUM HERBARUM

Bianca Braz Mattos (UFRJ); Renata Oliveira da Rocha Calixto (UFRJ); Eliana Barreto Bergter (UFRJ)

Resumo

Os polissacarídios e peptidopolissacarídios são polímeros envolvidas na arquitetura da parede celular. Além disso, representam importantes moléculas antigênicas relacionadas com a patogênese de diversos fungos. No estudo da parede celular de Aspergillus fumigatus, foi possível isolar peptidopolissacarídios enriquecidos em manose e galactose, denominados peptidogalactomananas (pGMs), que apresentavam intensa reatividade com soro de pacientes que apresentavam aspergiloma ou ABPA.

            Neste trabalho, foram estudados peptidopolissacarídios extraídos de micélio de Cladosporium herbarum, ascomiceto relacionado ao desenvolvimento de doenças alérgico-respiratórias em humanos. Após fracionamento por Cetavlon, o precipitado obtido foi analisado, sendo possível constatar que era constituído majoritariamente por açúcares (cerca 76% de açúcar e 18% de proteína), característico de peptidopolissacarídios. As moléculas foram separadas por eletroforese em SDS-PAGE, apresentando duas bandas predominantes de peso molecular igual a 44 e 47kDa.  A composição de monossacarídios também foi avaliada, revelando a predominância de galactose e manose (proporção de 48:45, respectivamente), sugerindo a presença de uma pGM. A pGM de C. herbarum foi submetida ao fracionamento em coluna de troca iônica SOURCE 30Q (Pharmacia AP, Suécia) eluida com gradiente descontínuo de NaCl    0,2 a 1,0M em tampão fosfato 0,01M, pH 7,0 , resultando em duas frações (FI e FII). Após analise do perfil protéico de FI e FII, foi possível concluir que FI era uma fração purificada das proteínas de 44 e 47kDa. Finalmente, foi observada a imunorreatividade dessas moléculas nos diversos estágios de purificação (glicoproteína bruta, pGM, FI e FII) com anti-soro de coelho anti-células totais de A. fumigatus, sugerindo que as pGMs extraídas desses dois micro-organismos apresentam epítopos conservados. A hipótese de reação cruzada entre as pGMs dos dois fungos foi sustentada, uma vez que a pGM de C. herbarum se mostrou reativa quanto testada contra soro de 14 pacientes  com aspergilose.

Apoio: CNPq, FAPERJ, UFRJ


Palavras-chave:  Cladosporium herbarum, imunorreatividade, peptidopolissacarídios