SCREENING DA ATIVIDADE DE PROTEASE EM BIBLIOTECA METAGENÔMICA ORIGINADA DE LODO DE BIORREATOR DE SISTEMAS DE TRATAMENTO DE EFLUENTES DE REFINARIA DE PETRÓLEO

Cynthia Canedo da Silva (Unicamp); Suzan P. Vasconcellos (Unicamp); Aline F. Viero (UFRJ); Ana Paula Rodrigues Torres (PETROBRAS); Valéria Maia de Oliveira (Unicamp)

Atualmente, existe uma intensa busca de novos microrganismos com potencial biocatalítico para aplicação nos processos industriais. Dentre as diversas enzimas de interesse industrial, as proteases são enzimas hidrolíticas com importante aplicação, particularmente em indústrias de detergentes e alimentos. Sabendo que a maior parte dos microrganismos existentes no ambiente é de difícil cultivo, estratégias moleculares, como a construção de bibliotecas metagenômicas em fosmídeos, estão sendo adotadas para acessar novas enzimas microbianas de potencial biocatalítico. Este estudo teve o objetivo de selecionar clones de fosmídeos com atividade de protease em bibliotecas originadas de lodo bacteriano de efluentes de refinaria de petróleo. Foram construídas duas bibliotecas metagenômicas, a primeira (MBR) a partir de DNA extraído de lodo bacteriano originado de biorreator a membrana operando em escala piloto, e a segunda (BAT) a partir de lodo aclimatado e enriquecido em batelada com 1,0 g/L de fenol. Para o screening de proteases, os clones foram plaqueados em meio LB sólido contendo 1% de Skim Milk e cloranfenicol. As placas foram incubadas a 37°C por 4 dias e os clones que apresentaram um halo de degradação ao redor da colônia foram selecionados. Um total de 10.000 clones pertencentes à biblioteca MBR e 3.200 à BAT, aproximadamente 500 Mb, foram triados para atividade de protease, sendo encontrados 2 hits positivos na biblioteca MBR. Estes fosmídeos serão submetidos ao pirosequenciamento para posterior caracterizarão genética. O acesso a novas proteases pode representar uma fonte imediata de novos produtos biocatalíticos. Ainda, estes clones positivos poderão ser testados e melhorados, por evolução dirigida, para aplicação em diversos processos industriais.