SCREENING DE ATIVIDADE FENÓLICA EM BIBLIOTECA METAGENÔMICA ORIGINADA DE LODO BACTERIANO PROVENIENTE DE SISTEMAS DE TRATAMENTO DE EFLUENTES DE REFINARIA DE PETRÓLEO

Cynthia Canedo da Silva (UNICAMP); Aline F Viero (UFRJ); Ana Paula Rodrigues Torres (PETROBRAS); Valéria Maia de Oliveira (UNICAMP)

Os compostos fenólicos estão habitualmente presentes nos efluentes industriais, como refinarias de petróleo, e são tóxicos à saúde humana. A biorremediação emprega microrganismos para mineralizar ou complexar compostos poluentes, transformando-os em compostos inertes ou não tóxicos. Esta tem se tornado uma metodologia avançada para o tratamento dos efluentes industriais, constituindo uma prática comumente aplicada nas refinarias para remoção dos fenóis. Este trabalho teve como objetivo a bioprospecção da atividade de degradação de fenol em bibliotecas metagenômicas obtidas a partir de microbiota presente em lodo de sistema de tratamento de refinarias de petróleo. O DNA de alto peso foi obtido com sucesso de lodo bacteriano de biorreatores utilizando protocolo baseado no método de “freeze-thaw” e separação dos fragmentos de interesse em eletroforese de campo pulsado. Foram construídas duas bibliotecas metagenômicas, a primeira (MBR) a partir de DNA originado de biorreator a membrana operando em escala piloto e a segunda (BAT) a partir de lodo aclimatado e enriquecido em batelada com 1,0 g/L de fenol. O screening para atividade fenólica foi realizado em meio mineral, acrescido de 0,02% de fenol como única fonte de carbono. As placas foram incubadas a 37°C por 24 h e, para a detecção dos clones capazes de utilizar fenol, foi adicionado MTT (indicador de respiração celular) e realizada nova incubação por 1 h a 37°C. Os hits positivos foram determinados pela formação da cor violeta. Um total de 10.000 clones pertencentes à biblioteca MBR e 3.200 à BAT, aproximadamente 500 Mb, foram triados para atividade de degradação de fenol. Destes, 211 clones da biblioteca MBR e 202 clones da biblioteca BAT mostraram-se positivos para a função de interesse. Estes foram submetidos à reação de PCR para o gene da fenol hidroxilase, sendo detectados 6 clones positivos no total. Estes clones serão submetidos ao pirosequenciamento para caracterização genética e também à cromatografia gasosa para seleção dos melhores degradadores de fenol. Acreditamos que este estudo permitirá a obtenção de novos genes relacionados à degradação de fenol, uma vez que um baixo número de clones foi amplificado no screening baseado em seqüências conhecidas, bem como a potencial aplicação destes em processos de tratamento de efluentes de refinarias.