CARACTERIZAÇÃO DAS FUNÇÕES ENVOLVIDAS NA PRODUÇÃO DA E NA IMUNIDADE À AUREOCINA A70.

Marcus Lívio Varella Coelho (UFRJ); Maria do Carmo de Freire Bastos (UFRJ)

A aureocina A70 é uma bacteriocina da classe II, produzida por Staphylococcus aureus e codificada pelo plasmídio pRJ6 (7,9 kb), sendo composta por quatro peptídios de baixo peso molecular (2.954 a 3.086 Da). Dentre as suas características mais marcantes estão a sua termoestabilidade, a sua sensibilidade à tripsina e a capacidade de inibir patógenos alimentares importantes como Listeria monocytogenes. Por estes motivos, ela possui um grande potencial de aplicação como biopreservativo de alimentos. Contudo, apesar destes conhecimentos acerca desta aureocina, os mecanismos envolvidos na proteção da célula produtora (imunidade) contra a ação da aureocina A70 ainda não foram elucidados. Há no pRJ6 um provável operon envolvido com a imunidade: o operon  orfAB. A orfB codifica uma proteína altamente hidrofóbica, com elevado pI e quatro possíveis domínios de membrana, características encontradas em proteínas de imunidade, enquanto a orfA codifica uma proteína com características de reguladores de transcrição, não estando, portanto, diretamente envolvida na conferência de imunidade. O objetivo deste trabalho é entender como a imunidade à aureocina A70 funciona. Para tanto, o operon orfAB foi amplificado por PCR e clonado no vetor pT181mcs (Tc^R) e introduzido nas estirpes de S. aureus RN4220, RN451, RN450, Sa7 e Sa8 (as duas últimas são de origem clínica) através de transdução generalizada, utilizando-se o fago 80a. Foi observado por experimentos de inibição em placa de petri que todas as estirpes deixaram de ser sensíveis à aureocina A70. Experimentos emplaca de microdiluição, acompanhando-se o crescimento de três dessas estirpes por 24 h, demonstraram que as estirpes Sa7 e Sa8 desenvolveram um grau de imunidade menor do que a RN4220. Experimentos em andamento visam a clonagem isolada da orfB no vetor de expressão pCN37, objetivando-se confirmar que é este o gene que confere imunidade à aureocina A70. Quanto à orfA, sabe-se apenas que a sua ausência afeta a produção de bacteriocina na estirpe RN451 (lisogênica para o fago f11) mas não afeta a produção na estirpe RN450 (isogênica da RN451, curada do f11). Isto pode se dever ao fato de a orfA apresentar elevada identidade com proteínas reguladoras da família do fago PsbX de Bacillus spp.. Experimentos adicionais estão sendo feitos para se elucidar este processo.