RASTREAMENTO EPIDEMIOLÓGICO ATRAVÉS DE ANÁLISE MOLECULAR DE LISTERIA MONOCYTOGENES SOROTIPO 4B ORIUNDAS DE FONTES ALIMENTAR E HUMANA

André Victor Barbosa (FIOCRUZ); Cristhiane Moura Falavina dos Reis (FIOCRUZ); Leonardo Alves Rusak (FIOCRUZ); Ernesto Hofer (FIOCRUZ); Deyse Christina Vallim (FIOCRUZ)

Listeria monocytogenes é um patógeno intracelular e agente etiológico da listeriose, doença transmitida através de alimentos. Este patógeno acomete preferencialmente, indivíduos imunocomprometidos, gestantes e recém-natos. Os sorovares 1/2a, 1/2b e 4b estão envolvidos na maioria dos casos, sendo o sorotipo 4b, responsável pela maioria dos surtos em humanos. Estudos de subtipagem molecular identificaram três linhagens genéticas em L. monocytogenes com diferentes potenciais patogênicos, sendo o sorotipo 4b pertencente à linhagem I, que inclui os principais clones epidêmicos ECI, ECII e ECIV. Tendo em vista esse cenário, o objetivo foi caracterizar a relação clonal de cepas do sorotipo 4b circulantes no Brasil de fontes alimentar e humana e avaliar a presença de marcadores moleculares de virulência. Neste estudo foi utilizado um grupo representativo de amostras de L. monocytogenes sorotipo 4b, isoladas de produtos cárneos durante o período de 2006-2008 no Brasil (39 cepas), um grupo de amostras de mesma natureza provenientes da Colômbia do ano de 1996 (9 cepas) e um grupo de amostras de origem humana (37 cepas) isolados no período entre 1970-2008. As cepas foram identificadas através de métodos fenotípicos (caracterização bioquímica e sorológica) e métodos genotípicos, através da PCR, para a identificação e confirmação de gênero, espécie, linhagem e sorotipo. A presença de clones epidêmicos e dos marcadores de virulência foi realizada através de técnica da PCR utilizando iniciadores específicos para ECI e ECII e para os genes: hly, iap, actA, prfA, inlA, inlB, inlC, inlJ, plcA. Para o estudo da diversidade genética utilizamos a técnica de ERIC-PCR. Os perfis eletroforéticos foram analisados através do programa Bionumerics e foi aplicado o coeficiente de Dice e gerados dendrogramas através do UPGMA. Do total de 48 cepas de alimento, 7 (14,6%) foram determinadas como ECI e 17 (35,4%) como ECII, por outro lado, do total de 37 cepas humanas, 10 (27%) foram ECI e 13 (35,1%) ECII. Quanto aos genes de virulência pesquisados, todas as cepas foram positivas para os genes: hly, inlB ,inlC ,inlJ ,actA, plcA e iap. Entretanto, para o gene inlA as cepas de alimento tiveram 95% de positividade, sendo todas as humanas positivas. O gene prfA se mostrou presente em todas as cepas de alimento, porém só em 86,5% das cepas humanas. Os perfis de DNA obtidos através do ERIC-PCR apresentaram de 8-11 bandas variando 200-2000 pb. Dois fragmentos conservados de 400 e 500 pb foram observados em todas amostras. A técnica mostrou ser uma ferramenta útil e de baixo custo podendo ser empregada na análise filogenética de Listeria spp.