IDENTIFICAÇÃO POR MULTIPLEX-PCR DE CANDIDA SPP. ISOLADAS DE INFECÇÃO HOSPITALAR

Paulo Murillo Neufeld (UFRJ); Helena Keiko Toma (UFRJ); Marcos Dornelas-ribeiro (HEMORIO); Manuela da Silva (FIOCRUZ); Márcia dos Santos Lazéra (FIOCRUZ)

A habilidade de identificar acuradamente microrganismos hospitalares é fundamental para qualquer sistema de vigilância em saúde, pois as informações geradas nos laboratórios de microbiologia condicionam as ações de controle, bem como influenciam as políticas e diretrizes dos programas institucionais e governamentais. Assim, não há dúvidas de que a consolidação dos laboratórios de microbiologia nos programas de prevenção de infecção hospitalar passa tanto pela otimização das técnicas convencionais, quanto pela aquisição de novas metodologias de diagnóstico. Classicamente, diversos métodos não-culturais têm sido propostos, não apenas para fins de diagnóstico como também para estudos de epidemiologia. No âmbito hospitalar, a biologia molecular tem se mostrado útil para estes 2 objetivos, contribuindo para uma maior rapidez na definição das etiologias, bem como para o entendimento dos mecanismos envolvidos na ocorrência de surtos. Dentre os diversos protocolos de PCR disponíveis, a multiplex-PCR tem sido amplamente descrita e seus parâmetros criteriosamente avaliados. Esta variante da PCR, além de sua simplicidade, tem como principal vantagem a possibilidade de amplificação simultânea de diferentes sequências alvo com mais de um par de primers em um único tubo de reação, o que permite identificar um grande número de espécies fúngicas, levando, consequentemente, a uma considerável economia de tempo e trabalho. O objetivo do presente estudo foi avaliar a utilização da multiplex-PCR na identificação de isolados clínicos de Candida spp. Para tanto, foram extraídos com DNAzol (Invitrogen, USA) o DNA genômico de 108 cepas de Candida spp. recuperadas de infecção hospitalar para a amplificação pela técnica de multiplex-PCR,  empregando, combinadamente, os primers levedura-específicos UNI1 e UNI2 e os primers espécies-específicos Calb, Cgla, Ckru, Ctro, Cpar, Cgui, Clus e Cdub que amplificam as regiões ITS1 e ITS2 da maioria das Candida de importância médica. Pela técnica da multiplex-PCR, foi possível distinguir corretamente todas as espécies de Candida avaliadas e seus resultados foram concordantes (100%) com aqueles do tubo germinativo e clamidósporo para C. albicans, CHROMagar (Probac, Brasil) para C. albicans, C. tropicalis e C. krusei e VITEK (BioMerieux, Brasil) para todos os 108 isolados.