| Área: Micobacteriologa ( Divisão C ) GLICOLIPÍDEOS DAS CEPAS PASTEUR E MOREAU DE MICOBACTERIUM BOVIS BCG: AVALIAÇÃO E APLICAÇÃO NO SORODIAGNÓSTICO DA TUBERCULOSE HUMANA. Lais Bessa Santos (UFRJ); Eliana Barreto Bergter (UFRJ); Marta Maria Oliveira (UFRJ); Walter Martin Roland Oelemann (UFRJ)
ResumoA tuberculose (TB) é a principal causa de morbidade e mortes a partir de um único agente infeccioso em todo o mundo. O diagnóstico padrão ouro baseia-se na cultura e isolamento da micobactéria, fato considerado uma desvantagem na luta do controle da doença, devido à demora do crescimento em cultura desse microrganismo. Desta forma, há interesse no desenvolvimento de métodos de diagnóstico alternativos, rápidos e precisos, tais como o sorodiagnóstico. A vantagem do imunodiagnóstico encontra-se na fácil obtenção de material clínico (sangue) e rapidez na obtenção de resultados. O ensaio imunoenzimático (ELISA) é um método muito estudado no âmbito da sorologia da TB e os antígenos utilizados incluem frações subcelulares, proteínas recombinantes e glicolipídios micobacterianos. No presente projeto, avaliamos frações glicolipídicas, obtidas das cepas vacinais M. bovis BCG Pasteur e M. bovis BCG Moreau, crescidas em meio Sauton e meio IVM, na sorologia da TB.
Os glicolipídios das das duas cepas crescidas em meio Sauton (Pasteur e Moreau; PS e MS) e IVM (Moreau; MIVM) foram extraídos com clorofórmio/metanol e fracionados em coluna de gel de silica utilizando um gradiente de solventes orgânicos com polaridade crescente. Um total de 44 frações glicolipídicas foram avaliadas e caracterizadas por cromatografia em camada fina e ELISA. Para o ELISA, 0,5 ug de cada fração foram adsorvidos em poços de microplacas. Em seguida, pools de soros de pacientes com TB e de indivíduos sadios (ambos brasileiros vacinados com BCG Moreau) foram adicionados nas diluições 1/640, 1/1280 e 1/2560. Os imunocomplexos formados foram revelados com anti-IgG-Peroxidase. Os resultados do ELISA demonstraram que o ensaio in-house possui capacidade em diferenciar entre indivíduos sadios (TB-) e pacientes com TB confirmada (TB+) empregando glicolipídios extraídos dessas diferentes cepas. Das 44 frações testadas, os antígenos 2 e 7 (MIVM) e 17, 12, 23 e 39 (PS) são os mais promissores, uma vez que mostram diferenças de densidade óptica significativas para os soros positivos e negativos.
Financiamento: CNPq (Projeto Universal e Instituto do Milênio)
Palavras-chave: Glicolipídeos, Micobactéria, Sorodiagnóstico |