IMUNIZAÇÃO COM O PLASMÍDEO PMAC/PS CONTENDO O FRAGMENTO SCFV OBTIDO A PARTIR DO MAB ANTI-IDIOTÍPICO AB2-BETA, QUE MIMETIZA O ANTÍGENO GP43 DE PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS RECRUTA CÉLULAS DENDRÍTICAS NOS LINFONODOS

Karen Spadari Ferreira (UNIFESP); Marcelo Macedo Brígido (UnB); Maria Cristina Garcia (USP); Andrea Queiroz Maranhão (UnB); Suelen Silvania Santos (USP); Sandro Rogério de Almeida (USP)

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, endêmica no América Latina. O agente etiológico da doença é o fungo dimórfico térmico, Paracoccidioides brasiliensis (Pb). A glicoproteína de 43 kDa (gp43) é o principal antígeno do fungo. Anticorpos direcionados contra esta glicoproteína são detectados nos soros de todos pacientes com PCM. Foi demonstrado que camundongos imunizados com anticorpo monoclonal (MAb) anti-gp43 (Ab1), induz a cascata idiotípica, a qual induz tanto anticorpos anti-Id (Ab2) como anticorpos anti-anti-Id (Ab3). Para caracterizar a modulação da cascata idiotípica, camundongos foram imunizados com MAb anti-gp43 (17C) para produção de hibridomas. MAbs Ab2 chamados 7.B12 inibiram  mais de 95% da ligação da gp43 ao MAb 17c (Ab1), sugerindo que este MAb anti-Id se liga ao idiotopo, representando a imagem interna do antígeno gp43. Para melhor caracterizarmos os MAbs 7.B12, construímos através de engenharia genética um fragmento de anticorpo de cadeia única (scFv) a partir do Ab2β que mimetiza a gp43 de Pb, para podermos, juntamente com células dendríticas, utilizá-los como ferramenta para imunoterapia e vacinação em modelo experimental da PCM. Os resultados sugerem que a construção plasmidial pMAC/PS-scFv é capaz de recrutar células dendríticas para os linfonodos regionais após imunização intramuscular, sendo então, importantes na ativação da resposta imune. Além disso, mostramos que camundongos BALB/c, imunizados pela via subcutânea com células dendríticas transfectadas com o pMAC/PS-scFv são capazes de induzir proliferação de células totais dos linfonodos, quando estes foram re-estimulados in vitro com o anticorpo anti-gp43 (Ab1). Observamos também que após transfecção do pMAC/PS-scFv em células CHO, o scFv foi secretado no sobrenadante de cultura, mostrando que o DNA além de entrar na célula, é transcrito e a proteína, secretada. Estes resultados descrevem que imunização com pMAC/PS-scFv podem ser utilizados para recrutar células dendríticas nos linfonodos, iniciando a resposta imune de células T, além de mostrar a capacidade das células dendríticas em apresentar o scFv in vivo.