PRODUÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE ANTÍGENO PARA DIAGNÓSTICO DE ASPERGILOSE

Cheila Denise Ottonelli Stopiglia (PPGM:CM, UFRGS); Charley Christian Staats (CBiot, UFRGS); Luana Kammler (ICBS, UFRGS); Fabiane Jamono Vieira (ICBS, UFRGS); Julia Medeiros Sorrentino (ICBS, UFRGS); Andressa Grazziotin Mondadori (ICBS, UFRGS); Cibele Massotti Magagnin (ICBS, UFRGS); Daiane Heidrich (ICBS, UFRGS); Joanna Inês Ayres Reis (ICBS, UFRGS); Maria Lúcia Scroferneker (PPGM:CM, UFRGS); Célia Regina Ribeiro da Silva (CBiot, UFRGS); Marilene Henning Vainstein (CBiot, UFRGS)

A aspergilose é uma doença fúngica oportunista que compromete o sistema imune afetando, principalmente, indivíduos imunocomprometidos. Os métodos empregados na identificação precoce desta doença são pouco sensíveis e específicos e, aliados com a falta de características clínicas definidas desta infecção, tornam o diagnóstico um grande desafio, o que freqüentemente provoca atrasos fatais na terapia adequada. O objetivo deste trabalho é desenvolver e caracterizar antígenos para diagnóstico de pacientes acometidos por aspergilose. Diversas linhagens de diferentes espécies do gênero Aspergillus (Aspergillus terreus - HCPA, CMMI 233-3,1; Aspergillus fumigatus - MG 2, HCPA, 16913 ATCC; Aspergillus flavus - HCPA, MG, F58; e Aspergillus niger - HCPA, MG, 19899) foram cultivadas por 15 dias a 30°C em caldo Sabouraud ou Smith, para produção dos exoantígenos. Após o cultivo, os antígenos foram dialisados e liofilizados. Duas estratégias estão sendo conduzidas para a avaliação do potencial destes antígenos como estratégias diagnósticas. Os antígenos estão sendo testados por imunodifusão frente a soros de pacientes com diagnóstico clínico de aspergilose e outras micoses profundas. Paralelamente, a fração protéica dos antígenos está sendo avaliada por espectrometria de massas. O extrato total foi analisado em géis de poliacrilamida e frações de proteínas com diferentes massas moleculares foram aluídas do gel após tratamento com tripsina. Os pools de peptídeos serão analisados em um espectrômetro de massas ESI-MS/MS acoplado a um cromatógrafo e os resultados analisados (Mascot). Dessa forma, espera-se desenvolver um antígeno sensível e específico para a detecção da aspergilose, o qual possa proporcionar um diagnóstico precoce da doença. Apoio: FAPERGS, Uniprote-MS, Capes e PIBIC/CNPq.