CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE AMOSTRAS DE E.COLI ISOLADAS DE CRIANÇAS COM DIARRÉIA AGUDA E DE REPETIÇÃO NA CIDADE DE MANAUS

Raquel Oliveira Pessoa (ILMD - FIOCRUZ); Ivanildes dos Santos (ILMD - FIOCRUZ); Yury Oliveira Chaves (INPA); Paula Taquita Serra (ILMD - FIOCRUZ); Dayane Martins Barbosa Serfaty (ILMD - FIOCRUZ); Maria Edilene Martins Almeida (ILMD - FIOCRUZ); Leidiane Amorim Soares (ILMD - FIOCRUZ); Luis André Morais Mariúba (ILMD - FIOCRUZ); Paulo Afonso Nogueira (ILMD - FIOCRUZ); Patrícia Puccinelli Orlandi Nogueira (ILMD - FIOCRUZ)

A diarréia é uma das principais causas de mortalidade entre as crianças nos países em desenvolvimento, sendo a Escherichia coli uma das mais freqüentes como agentes causadores desta doença. A bactéria pode se classificar em pelo menos 6 patotipos: E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli enteroagregativa (EAEC), E. coli enterohemorrágica (EHEC), E. coli enteroinvasiva (EIEC) e E. coli difusamente aderente (DAEC). Neste estudo envolveu a caracterização molecular dos fatores de patogenicidade e a associação entre sintomas das E. coli diarreiogênicas isoladas de crianças com diarréia aguda ou de repetição na cidade de Manaus, Amazonas.

Foram selecionadas 36 amostras de fezes de crianças agrupadas em 3 diferente faixas etárias (0-12 meses; 13-24 m; 25-36 m), das quais foram isoladas 5 colônias de E. coli de cada amostra fecal coletada e semeada em meio MacConkey, totalizando em 180 amostras, as quais foram realizados os Testes Bioquímicos, Citrato de Simmons, TSI, EPM e MILi. Para a extração de DNA (método fenol-clorofórmio), foram escolhidas apenas 150 colônias, e em seguida foram pesquisados os seguintes fatores de virulência pela PCR: genes eae, aa, stx1 e stx2, bfp, LT e ST.

Das 36 amostras fecais coletadas, pelo menos 30 tiveram 1 ou mais colônia apresentando mais de um gene de virulência em conjunto [eae (EPEC), LT (ETEC), aa (EAEC), stx1 e stx2 (EHEC)] amplificado pela PCR, até agora, obtendo assim a porcentagem da distribuição destes genes que foram: 2,66% de stx1, 2,66% de stx2, 0,66% da associação entre stx1 e stx2 (característicos da EHEC atípica), 9,33% de eae; 8% de aa, 2,66% de LT, 3,33% da associação entre LT e eae, e 0,66% da associação entre eae, stx1, stx2, que são genes característicos da EHEC típica que está associada à Colite Hemorrágica (CH) e Síndrome Hemolítica Urêmica (SHU)

Apesar deste trabalho ainda demonstrar resultados iniciais, constatamos que dentre 5 colônias isoladas de cada amostra, pelo menos 3 apresentaram genes de virulência responsáveis pela diarréia e/ou possível associação para que isso ocorra, podendo classificá-las entre as E. coli diarreiogênicas EPEC, ETEC, EAEC, EHEC. Além disso, foram isoladas amostras contendo os genes stx e eae (EHEC típica) que estão implicadas na causa de doenças humanas graves, como CH e SHU.