DETECÇÃO DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS EM AMOSTRAS CLÍNICAS DE ANIMAIS ASSINTOMÁTICOS UTILIZANDO A TÉCNICA DE PCR EM TEMPO REAL

Daniel Henrique Bücker (UFMG); Dayana Ribeiro (UFMG); Luis Gustavo de Carvalho Pacheco (UFMG); Fernanda Alves Dorella (UFMG); Thiago Luiz de Paula Castro (UFMG); Núbia Seyffert (UFMG); Anderson Miyoshi (UFMG); Vasco Ariston de Carvalho Azevedo (UFMG)

A linfadenite caseosa é uma doença infecto-contagiosa crônica que acomete caprinos e ovinos, e tem grande impacto econômico na caprinovinocultura brasileira, causando condenação das carcaças dos animais, contaminação do leite e perda de lã nos ovinos. A doença é causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis, uma actinobactéria pleomórfica pertencente ao grupo CMN. Devido à grande importância econômica desta doença e a alta incidência da mesma nos rebanhos brasileiros, torna-se imperativo o desenvolvimento de um método diagnóstico eficaz para a detecção do patógeno no hospedeiro ainda em fase subclínica, com o intuito de controlar a transmissão da doença. A técnica de PCR em tempo real é bastante promissora para essa finalidade, por sua rapidez e alta sensibilidade. Foram realizadas coletas de sangue total e soro de 87 caprinos e 290 ovinos em propriedades rurais nos arredores de Araçatuba-SP. Os animais em sua maioria não possuíam sinais clínicos da doença, porém são criados em propriedades onde há animais doentes. Como teste comparativo foi relizado o ELISA indireto, utilizado para levantamentos de soroprevalência da doença. Foi encontrada baixa soroprevalência entre os animais testados. O DNA foi extraído utilizando a técnica de fenol-clorofórmio após a lise utilizando micropartículas de sílica sob forte agitação no equipamento Pre-Cellys®. A reação de PCR em tempo real utiliza como alvo o gene da fosfolipase D (pld), e como controle interno de amplificação,  o gene codificador da subunidade ribossomal mictocondrial 12S de caprinos e ovinos (12SrRNA). A técnica está sendo padronizada para a detecção do DNA do patógeno na fase subclínica da linfadenite caseosa, e testes de sensibilidade e especificidade serão realizados para a validação do teste frente aos demais testes disponíveis para a detecção da presença do patógeno no hospedeiro.
Apoio financeiro: FAPEMIG.