SELEÇÃO DOS CLONES PRODUTORES DE AMILASE PRESENTES NA BIBLIOTECA METAGENÔMICA DE TERRA PRETA DE ÍNDIO (TPI)

Carolinie Batista Nobre da Cruz (UFAM/CAM); Luciana Leomil (ULBRA); Leonor Alves de Oliveira da Silva (UFAM/CAM); Spartaco Astolfi-filho (UFAM/CAM)

Na floresta Amazônica são encontrados solos agricultáveis denominado de solo de Terra Preta de Índio (TPI), um solo rico em matéria orgânica e em minerais, a biodiversidade da Amazônia constitui uma fonte de valor altíssimo de microrganismos não-cultiváveis que podem ser isolados através das construções das bibliotecas metagenômicas, utilizando vetores de grandes fragmentos, com o objetivo de encontrar novas enzimas biocatalíticas. As amilases são enzimas da família das hidrolases capazes de degradar o amido e seus produtos de hidrólise até sacarídeos menores, de grande interesse biotecnológico devido à aplicação em processos industriais como na indústria farmacêutica, têxtil, detergente e alimentícia. Neste trabalho foram isolados clones recombianantes produtores de halo de hidrólise de amido da biblioteca metagenômica construída de DNA total extraído dos microrganismos presentes nas amostras de solos de TPI, estes clones foram isolados e submetidos a ensaios quantitativos de amilases pelo meio de cultura contendo o substrato específico (amido). Após o isolamento, o clone foi inoculado em meio de cultura Luria Bertani (LB) a 37^oC sob agitação de 150rpm e foi submetido aos ensaios enzimáticos dextrinizante e sacarificante, nas temperaturas de 30, 50, 70 e 100^oC por 10 minutos. Foram isolados 1.344 clones da biblioteca metagenômica, sendo que apenas 4 clones formaram halo amilolítico, e entre estes 1 halo de 2mm, 2 halos de 2,5mm e 1 halo de 3,0mm e 1.340 clones não formaram halos, em seguida um clone foi selecionado para os ensaios enzimáticos, a qual obtivemos os seguintes resultados das dosagens da atividade dextrinizante, baseada na variação da intensidade de cor do complexo iodoamido, produzindo 2.5, 1.0,1.0, 2.5 U/mL, e na atividade sacarificante baseada na produção de açucares redutores, produzindo 1.0, 1.0, 1.0, 2.3 U/mL de enzima na temperatura de 30, 50, 70 e 100^oC, respectivamente. Tais resultados indicam que o gene de alfa-amilase clonado deve ser codificador de uma enzima termoestável, como por exemplo, a enzima produzida por Bacillus liqueniformis, estes clones metagenômicos potencializam a descoberta de uma nova enzima de caráter termotolerante, sendo um produto de grande interesse industrial.
Apoio: CT-AMAZÔNIA/MCT/CNPq/FAPEAM