PATOTIPOS DE ESCHERICHIA COLI ISOLADAS DE LEITE MASTÍTICO BOVINO.

José Benedito Carvalho Fernandes (UFV); Larissa Goulart Zanardo (UFV); Newton Nascentes Galvão (UFV); Vitor de Oliveira Silva (UFV); Maria Aparecida Scatamburlo Moreira (UFV)

Fatores de virulência estão envolvidos em mecanismos de patogenicidade, dando condições de sobrevivência às bactérias em ambientes hostis e agrupando-as em patotipos. E.coli apresenta grande adaptabilidade em diferentes nichos. Objetivo foi detectar por teste bioquímico e molecular fatores de virulência em 27 E.coli de mastite bovina. Para detecção de entero e α-hemolisinas usou-se semeadura em placa Mestre com sangue carneiro desfibrinado acrescido 10mM de CaCl2 e o resultado visualizado em tempos pré-estabelecidos à 37ºC. A detecção das toxinas e fatores de necrose citotóxicos (CNFs) foi realizada em células Vero adicionando filtrado bacteriano acrescido de mitomicina C, e os resultados avaliados com base na perda de viabilidade e modificações morfológicas. A produção de biofilmes foi detectada pelo crescimento dos isolados em microplaca acrescido de cristal violeta e ácido acético e o resultado analisado baseado na D.O. do controle negativo. PCR foi usada para identificar marcadores de virulência, fatores de colonização e toxinas. Em nenhum isolado detectou-se CNFs e hemolisinas. Dentre os isolados, dois (7,4%) apresentaram produção de verotoxinas e se verificou genes de enterotoxina TL em quinze (55,6%) dos isolados. A enterotoxina EAST1 foi detectada em três (11,1%) isolados e verotoxina2 em dois (7,4%). Detectaram-se marcadores fimbriais para pap em dois isolados (7,4%), aer em um (3,7%) e kps em um (3,7%) isolado. Das bactérias analisadas, cinco (18%) foram consideradas grandes produtores de biofilme, onze (41%) médios e onze (41%) fracos. Para os marcadores analisados: Fímbria tipo1, Cs31A, STb, Pap, VT2 e aer , um (3,7%) isolado apresentou cinco, Fímbria tipo1, Cs31A, STb, Pap e era;, oito (29,7%) apresentaram três marcadores podendo agrupar-se em Fímbria tipo1, Cs31A e STb; ou Fímbria tipo1, EAST1 e kps; ou Fímbria tipo1, STb, VT2; ou Fímbria tipo 1, Cs31A, EAST1; ou ainda Fímbria tipo1, STb, EAST1. Doze (44,4%) isolados apresentaram dois marcadores, podendo agrupar-se em Fímbria tipo1 e STb, ou Fímbria tipo1 e Cs31A, ou ainda Fímbria tipo1 e Pap, enquanto seis (22,2%) isolados apenas um marcador, Fímbria tipo1. O conhecimento dos patotipos de E.coli de mastite bovina é importante para a redefinição dos perfis epidemiológico e patogênico, estabelecendo medidas preventivas e curativas específicas. Instuiçao: Universidade Federal de Viçosa