AVALIAÇÃO PRELIMINAR DO MÉTODO MAS-PCR(REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE MULTIPLEX ALELO-ESPECÍFICO) PARA DETECÇÃO DE RESISTÊNCIA A RIFAMPICINA EM MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

Paulo Cesar de Souza Caldas (CRPHF/ENSP/Fiocruz); Adalgiza da Silva Rocha (IOC/Fiocruz); Ângela Maria Werneck Barreto (CRPHF/ENSP/Fiocruz); Bianca Porphírio da Costa (CRPHF/ENSP/Fiocruz); Reginalda Ferreira de Melo Medeiros (CRPHF/ENSP/Fiocruz); Joselba Borges de Melo Araújo (CRPHF/ENSP/Fiocruz); Cristina das Graças Macedo Arruda (CRPHF/ENSP/Fiocruz); Leda Maria dos Santos (CRPHF/ENSP/Fiocruz); Phlip Noel Suffys (IOC/Fiocruz); Fátima Cristina Onofre Fandinho Montes (CRPHF/ENSP/Fiocruz)

A Rifampicina é uma droga importante no tratamento da tuberculose. Estudos anteriores demonstraram que 95 a 98% da resistência a esta droga é causada por mutações no gen rpoB. Esta mutação ocorre principalmente em 3 códons: 516, 526 e 531, na maioria das amostras resistentes a Rifampicina (70 a 95%). Os métodos mais comumente usados para detectar as mutações no rpoB, associadas a resistência a Rifampicina , são o sequenciamento de DNA, PCR-single-strand conformation polymorphism, entre outros. Porém são extremamente trabalhosos ou caros.O objetivo deste trabalho foi avaliar o método MAS-PCR (multiplex alle-specific PCR),utilizado para detectar as principais mutações, que tem sido relatadas como responsáveis pela resistência à Rifampicina na maioria dos isolados clínicos,de M.tuberculosis,em pacientes com tuberculose pulmonar,comparado com os resultados dos testes de sensibilidade as drogas antituberculose,pelo Método das Proporções(padrão ouro).Foram utilizadas DNA de 48 isolados clínicos de M.tuberculosis (24 sensíveis e 24 resistentes).Nenhuma mutação foi detectada nas 24 amostras sensíveis (100%).Para as 24 amostras resistentes,observou-se: 14 cepas com mutação no códon 531(58,3%),03 cepas apresentando mutação no códon 526 (12,5%) e outras 04 cepas com mutação no códon 516 (16,7%).Foi observada também a presença de 01 cepa (4,2%),contendo mutação em dois códons (531 e 516),enquanto que 02 cepas (8,3%) não apresentaram mutação nos códons estudados.Resultados discordantes podem ser explicados pela presença de mutações pontuais outros códons não estudados,mutações "missense" e/ou mutações fora da região "hot spot" do rpoB, associadas com a resitência a Rifampicina.O MAS-PCR apresentou uma  sensibilidade de 91,7% e especificidade de  100%,com intervalo de confiança de 95%,podendo ser utilizado em laboratórios clínicos para detectar as 3 principais  mutações do gen rpoB,de maneira rápida e econômica.Este teste pode ser considerado uma excelente ferramenta,contribuíndo para controlar a tuberculose por detectar pacientes infectados com bacilos resistêntes à Rifampicina.