IDENTIFICAÇÃO DE E. GALLINARUM E E. CASSELIFLAVUS POR PCR-RFLP DA REGIÃO 16S RDNA.

Aline Weber Medeiros (UFRGS); Paula Dalcin Martins (UFRGS); Rebeca Inhoque Pereira (UFRGS); Ana Paula Cassenego (UFRGS); Pedro Alves D'azevedo (UFRGS); Sueli Teresinha Van Der Sand (UFRGS); Jeverson Frazzon (UFRGS)

Gênero Enterococcus compreende bactérias Gram positivas, que habitam o trato gastrintestinal. Podem estar presentes no solo, água e alimentos. Enterococcus spp. são particularmente relevantes devido a sua associação com infecções hospitalares e facilidade em adquirir mecanismos de resistência. Enterococcus gallinarum e Enterococcus casseliflavus são espécies de difícil identificação por métodos tradicionais, principalmente sua diferenciação de E. faecium. O objetivo deste trabalho foi verificar a eficiência do uso de marcadores PCR-RFLP como ferramenta auxiliar na identificação de E. gallinarum e E. casseliflavus. Foram avaliados 59 isolados de Enterococcus sp. pertencentes a bacterioteca da UFRGS e UFSCPA. Sete eram linhagens referência de Enterococcus sp., 32 eram amostras de E. gallinarum e 20 E. casseliflavus isoladas de alimentos e clínicas, analisadas apenas por testes bioquímicos. O DNA dos isolados foi extraído e a parte de região do gene 16S rDNA foi amplificada por PCR. A clivagem do fragmento de 661 bp foi realizada pela enzima de restrição HinfI, com verificação dos produtos da digestão por eletroforese em gel de agarose 2%. Nas linhagens de referência de E. gallinarum e E. casseliflavus foi observado dois fragmentos de DNA de tamanhos de 589pb e 72pb, o que os difere das demais espécies na qual são produzidos fragmentos de DNA de 504pb, 85pb e 72pb. Em 32 isolados de E.gallinarum analisados por PCR-RFLP, 47% (15/32) geraram o padrão de DNA esperado e em 20 isolados de E. casseliflavus 25% (5/20) apresentaram os padrões esperados para PCR-RFLP. As linhagens negativas para PCR-RFLP foram re-submetidas a uma nova série de testes bioquímicos e reclassificadas como: E. faecium, E. faecalis e Enterococcus sp. As análises das sequências 16S rDNA de E.gallinarum e E.casseliflavus depositadas no GenBank, demostram que na posição 1268 estas espécies apresentavam uma timina, enquanto em todos os outros Enterococcus uma citosina ou timina era observada nesta posição. Os resultados obtidos revelam que o uso de marcadores moleculares PCR-RFLP foi eficiente para confirmar a identificação das espécies de E. gallinarum e E. casseliflavus.