Cecília Carvalho (UFAM); Luciana Leomil (UFAM); Spartaco Astolfi Filho (UFAM)

Os microrganismos possuem um papel fundamental na sustentabilidade do ecossitema, porém apenas 1% destes podem ser cultivados por técnicas tradicionais de cultivo, sendo necessário o desenvolvimento de métodos modernos para estudar a diversidade microbiana das comunidades bacterianas não-cultiváveis, pela extração total do DNA de um ambiente (Metagenoma), utilizando bibliotecas metagenômicas.Os solos são conhecidos como o reservatório de bactérias ainda desconhecidas, que chegam a conter até 10 mil espécies procarióticas não relatadas em um grama de solo. Dentre os diferentes tipos de solos Amazônicos existentes, há o de Terra Mulata (ou Terra Adjacente) que se caracteriza por se menos fértil que os solos próximos (solo de Terra Preta de Índio) e portanto, pouco explorado por ações antrópicas. Devido à enorme diversidade genética existente entre os microrganismos presentes nos solos e os pucos trabalhos existentes sobre Terra Mulata, este trabalho objetivoua clonagem de fragmentos de DNA metagenômico em fosmídios a partir do solo de Terra Adjacente provenientes da cidade de Presidente Figueiredo, no estado do Amazonas. A metodologia utilizada foi desde a extraçãodo DNA do solo por lise direta e purificação, seguida de seleção dos grandes fragmentos pela técnica de Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE), para a inserção em vetores fosmidiais. Após, esses vetores foram empacotados em fagos lambdas e clonados em células hospedeiras, sendo os clones recombinantes selecionados para análises de restrição que confirmam a presença dos insertos no vetor.Os resultados mostraram uma boa qualidade na extração do DNA de alto peso molecular, e a presença na bibliteca metagenômica de insertos variando de 28.000 a 45.000 pb,o que possibilitará a clonagem de óperons íntegros, codificadores de enzimas ou vias metabólicas de interesse biotecnológico. Além disso, a biblioteca possibilitará a análise da biodiversidade existente nesse tipo de solo.
Apoio: CT-AMAZÔNIA/MCT/CNPq/FAPEAM