IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE COLLETOTRICHUM GLOEOSPORIOIDES, ISOLADOS DE PAULLINIA CUPANA VAR. SORBILIS, COM OLIGONUCLEOTÍDEOS ESPÉCIE-ESPECÍFICO.

Pedro de Queiroz Costa Neto (UFAM); Aline Christien de Figueiredo Rondon (UFAM); Gabriela Ferreira Zanette (UFAM); Rozana de Medeiros Sousa Galvão (UFAM); José Odair Pereira (UFAM)

Os fungos e bactérias que vivem no interior dos tecidos e órgãos vegetais sem causar danos aparentes aos seus hospedeiros, apresentando interações antagônicas, neutras ou simbióticas com plantas, são denominados microrganismos endofíticos ou simplesmente endófitos. Os microrganismos endofíticos podem ser estudados a partir do seu isolamento, pela observação direta a partir de técnicas de microscopia ou por técnicas moleculares de amplificação de DNA, as quais têm sido utilizadas com sucesso na identificação de espécies de fungos ou linhagens intraespecíficas. Assim, a pesquisa teve como objetivo caracterizar fungos endofíticos do gênero Colletotrichum, isolados de guaranazeiro (Paillinia cupana H.B.K. var. sorbilis (Mart.) Ducke), por meio da técnica molecular de PCR com amplificação pelo oligonucleotídeo CgInt (específico para o gênero) e da região ITS do gene rDNA. Os endófitos foram isolados após descontaminação superficial de folíolos de guaranazeiro aparentemente sadios. Após esporulação, pequenos discos com micélio e esporos foram transferidos para frascos Erlenmeyer contendo 100mL de meio batata-dextrose, em temperatura ambiente por dez dias para crescimento micelial e posterior extração de DNA. A extração de DNA genômico foi realizada pelo método fenol/clorofórmio, utilizando tampão de extração (SDS), NaCl e etanol 100%, etanol 70%, Tris-HCl e EDTA. Na fase de quantificação do DNA, foi estimada a concentração com 2mL do DNA e 3mL do tampão da amostra. A quantificação foir ealizada por eletroforese em gel de agarose 0,8%, corado com brometo de etídio, a leitura foi realizada pela intensidade de fluorescência num fotodocumentador de imagnes com luz ultravioleta. A combinação de oligonucleotídeos CgInt (iniciador anverso) e ITS4 (iniciador reverso) foi testada em dezessete isolados para amplificação espécie-específica de Colletotricum gloeosporioides, pela técnica de PCR, essa combinação foi eficiente para a maioria dos isolados de Colletotrichum, sendo amplificada uma banda de aproximadamente 450 pares de de bases. Não foi observada amplificação para as espécies Glomerella acutata (EGF9, EGF12) e C. boninense (EGF20). Esse resultado confirma a eficácia do par de oligonucleotídeos espécie-específico para identificação dos isolados de C. gloeosporioides.