UTILIZAÇÃO DA TÉCNICA DE PCR-DGGE NO ESTUDO DA DIVERSIDADE DE LEVEDURAS EM ÁGUAS ESTUARINAS

Ricardo Augusto Nink (UESC); Cleidianne Souza Pereira Rodrigues (UESC); Salatiel Santana de Souza (UESC); Ana Cácia Freire dos Santos (UESC); João Carlos Teixeira Dias (UESC); Rachel Passos Rezende (UESC)

Diversas espécies de leveduras têm sido isoladas de ambientes aquáticos, sendo a maior parte pertencente aos gêneros Aureobasidium, Candida, Cryptococcus e Pichia. Muitas dessas espécies se originam de ambientes terrestres e efluentes lançados nas águas. Comunidades de leveduras em águas limpas são compostas por populações esparsas de espécies não-fermentativas. Já em águas poluídas, há o predomínio de populações densas de espécies fermentativas, incluindo leveduras oportunistas como às pertencentes ao gênero Candida. O presente trabalho visou estudar a comunidade de leveduras do estuário do Rio Cachoeira (Ilhéus-BA) utilizando a técnica de PCR-DGGE. Coletou-se amostras de água superficial e sedimento em 4 diferentes pontos (em março/2009 e maio/2009). Em cada ponto, aferiu-se também a salinidade da água. O DNA dos microrganismos presentes na água foi extraído após filtragem em membrana de 0,22µm, seguida de choque térmico e fenol-clorofórmio; e o DNA do sedimento foi extraído com o Kit PowerSoil (MoBio). O DNA foi amplificado com os primers NL1 (+GC-Clamp) e LS2 para a região D1 do gene rRNA 26S. Os amplicons foram corridos em gel de poliacrilamida 10%, com gradiente desnaturante de 30 a 65%, por 4 horas a 200V. Utilizou-se amplicons de Candida parapsilosis e C. albicans (ATCC) como controles-positivos. O perfil eletroforético das bandas do DGGE mostrou que o período de coleta exerceu maior influência sobre a diversidade de leveduras que o gradiente de salinidade, devido à variação da concentração de nutrientes entre o período seco (Março) e o chuvoso (Maio). Todas as amostras tiveram amplicons com perfil semelhante à C. albicans e algumas amostras também à C. parapsilosis. A presença desses patógenos está relacionada à ambientes com alta concentração de matéria orgânica, como é o caso do estuário do Rio Cachoeira, que recebe efluentes domésticos sem tratamento. O perfil eletroforético observado corrobora os resultados obtidos por outros pesquisadores que utilizaram técnicas de cultivo, em que ocorre redução da diversidade e aumento da densidade de algumas espécies em águas poluídas. A técnica de PCR-DGGE mostrou-se uma excelente ferramenta no estudo da diversidade de leveduras, bio-indicadoras da qualidade da água.