| Área: Genética e Biologia Molecular ( Divisão N ) ESTUDOS DE CONSERVAÇÃO E SELEÇÃO DE "PRIMERS" ESPECÍFICOS PARA MONITORAMENTO DE LACTOBACILLUS PLANTARUM EM FEZES HUMANAS
Giselle A. Nobre Costa (UEL); Gislayne Trindade Villas-bôas (UEL); Kérley Braga P. Bento Casaril (UEL); Laurival A. Villas-bôas (UEL); Lúcia Helena S. Miglioranza (UEL)
ResumoO gênero Lactobacillus é composto pelas mais importantes bactérias ácido lácticas (BAL) com status GRAS, apresentam grande importância tecnológica e industrial, dada a sua presença em muitos produtos alimentícios e consequente efeito benéfico de algumas espécies na microbiota intestinal humana. Entretanto, o monitoramento de bactérias láticas no intestino humano é dificultado pela diversidade e grande proximidade genética entre as espécies presentes no trato gastrointestinal humano. Um microrganismo de grande interesse é o Lactobacillus plantarum, com características probióticas, e objeto de uma investigação envolvendo seres humanos, submetidos à ingestão dessa espécie por meio de leite fermentado.
O presente trabalho teve por objetivos avaliar a conservação da sequência de bases do gene codificante para uma proteína Recombinase (recA) em BAL e selecionar iniciadores específicos para L. plantarum, que será monitorado por reação em cadeia da polimerase.
Para tanto, a partir de bancos de dados, foram recuperadas 29 sequências nucleotídicas correspondentes ao gene recA de diferentes espécies de BAL de ocorrência comum em alimentos e em fezes humanas, compreendendo as espécies L. plantarum, L. paraplantarum, L. argentoretensis, L. casei, L. paracasei, L.delbruekii, L. acidophilus, L. helveticus, L. brevis, L. reuteri, L. salivarius, L. intestinalis, Bifidobacterium animalis, B. longum e Streptococcus thermophillus. As sequências foram comparadas entre si com a utilização do programa MEGA 4, e foi selecionada para análise, uma região de 322 pb. Uma árvore filogenética foi construída por neighbor-joining, baseado no Coeficiente de Nei. As sequências de diferentes espécies foram agrupadas separadamente, permitindo a seleção de um par de iniciadores, que foi capaz de amplificar especificamente um fragmento de 108 pb para linhagens de L. plantarum, permitindo a diferenciação de linhagens desta espécie das demaisuso destes iniciadores em amplificações de DNAs extraídos de material fecal obtido dos voluntários da pesquisa, possibilitará o monitoramento deste microrganismo no trato gastrointestinal bem como os seus efeitos sobre a microbiota natural dos indivíduos em teste.
Palavras-chave: Probiótico, L. plantarum, RecA |