| Área: Microbiologia Clinica ( Divisão A ) EFICÁCIA DOS MÉTODOS FENOTÍPICOS NA IDENTIFICAÇÃO DE CEPAS DO COMPLEXO BURKHOLDERIA CEPACIA PARA DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO EM PACIENTES COM FIBROSE CÍSTICA. Priscila Dentini (UNICAMP); Eliane Picoli Alves Bensi (UNICAMP); Kateli Fiolo (UNICAMP); Cibele Zanardi Esteves (UNICAMP); José Dirceu Ribeiro (UNICAMP); Luciana Cardoso Bonadia (UNICAMP); Carmen Silvia Bertuzzo (UNICAMP); Carlos Emílio Levy (UNICAMP)
Resumo
Introdução: Complexo Burkholderia cepacia (Cbc) é um grupo de importantes patógenos na doença pulmonar de pacientes com Fibrose Cística (FC). Atualmente 9 genomovares foram descritos como pertencentes ao Cbc, além do genomovar X, que foi proposto recentemente, e pelo menos outros 7 grupos de taxonomia indefinida. B. multivorans (G-II) e B. cenocepacia (G-III) têm sido apontados como os genomovares de maior impacto na piora da função pulmonar destes pacientes, causadores de um quadro séptico denominado de "Síndrome Cepacia", com elevada taxa de morbidade e mortalidade. Diante deste cenário e do perfil de resistência aos antimicrobianos apresentado por este grupo de microrganismos, a identificação rápida dos genomovares é de extrema importância para o monitoramento da colonização/infecção e terapêutica adequados, principalmente quando há necessidade de intervenção cirúrgica para transplante pulmonar.
Objetivos: O trabalho tem o objetivo de testar a eficiência da identificação fenotípica dos genomovares do Cbc pelo Vitek®2 Compact (BioMeriéux) e por meio de testes bioquímicos convencionais.
Material e Métodos: Cepas-padrão adquiridas da coleção BCCM/LMG foram identificadas fenotipicamente por testes bioquímicos e pelo Vitek®2. Posteriormente, foi extraído o DNA genômico para amplificação do gene recA, pelo método de PCR, utilizando-se os primers BCR1 e BCR2, que são específicos para o Cbc. Em seguida foi realizado o sequenciamento do gene recA e, paralelamente, uma segunda amplificação, pelo método Nested-PCR, onde foram utilizados os Primers específicos para os genomovares do Cbc. Outros 48 bacilos Gram negativos não fermentadores foram testados para verificar a especificade dos primers e demais testes.
Resultados e discussão: O Vitek®2 identificou corretamente 94% cepas testadas como pertencentes ao Cbc, porém mostrou-se pouco eficiente para a identificação dos genomovares. Para todas as cepas identificadas como Cbc, o equipamento sugere alguns testes adicionais para a diferenciação entre 4 genomovares: B. cepacia (G-I), B. multivorans (G-II), B. vietnamiensis (G-V) e B. stabilis (G-IV). A identificação fenotípica através de testes bioquímicos convencionais mostrou-se útil como uma ferramenta de triagem para identificação presuntiva, porém, para nenhuma das cepas foi suficiente para diferenciar os genomovares. Os resultados reforçam sobre a necessidade de utilização de outras técnicas para a identificação rápida e adequada destes microrganismos, como métodos de biologia molecular e espectrometria de massa.
Palavras-chave: Complexo Burkholderia cepacia, Genomovares, Identificação fenotípica e molecular, PCR, Sequenciamento de DNA |