EXTRAÇÃO DE PHB PRODUZIDO POR UMA ESPÉCIE DE PSEUDOMONAS

Ane Gerber Crochemore (UFPel); Maria Laura Turino Mattos (Embrapa); Claire Tondo Vendruscolo (UFPel); Luis Antonio Suita de Castro (Embrapa)

Determinados microrganismos são capazes de acumular polihidroxialcanoatos (PHAs), que são poliésteres que possuem grande potencial biotecnológico, podendo ser empregados como matéria-prima para diferentes produtos, tais como: embalagens plásticas biodegradáveis, fios de suturas e próteses, base para inoculantes, matriz para liberação controlada de fármacos e agrotóxicos. O PHB (polihidroxibutirato) é um dos polímeros mais estudados da família dos PHAs e é o mais comumente sintetizado por bactérias. Estes biopolímeros têm como atrativo serem totalmente degradados a CO₂ e água, poderem ser obtidos a partir de fontes renováveis de carbono e possuírem propriedades similares aos pláticos convencionais. Este trabalho teve como objetivo realizar a extração de PHB produzido por uma espécie de Pseudomonas, cepa STC4, detectado por microscopia eletrônica de transmissão. Para o cultivo da cepa STC4 preparou-se um inóculo a partir de uma alçada da cepa mantida em agar, sendo inoculada em frascos contendo 50 mL de YM. Os frascos foram incubados em agitador orbital por 20 h, a 28 ºC e 150 rpm. Deste inóculo foram transferidos 10 mL para catorze erlenmeyers de 500 mL, contendo 90 mL de caldo nutritivo, suplementado com 20 mL de uma solução de glicose com concentração de 100 gL^-1 e cultivado por 48 h, a 28 ºC e 150 rpm. Este cultivo foi realizado duas vezes para conseguir-se uma quantidade razoável de células. Após o término do cultivo, o caldo foi centrifugado a 6000 rpm e lavado duas vezes com água destilada. Às células (5 g) foi adicionado 100 mL de clorofórmio, aquecido sob agitação magnética por duas horas. O conteúdo foi centrifugado a 3000 rpm, a fase inferior foi retirada com pipeta Pasteur e transferida para uma placa de Petri, tampada e colocada em uma cuba de vidro para que ocorrese  lenta evaporação do solvente. Para total evaporação do clorofórmio e formação do biofilme foram necessários sete dias. Foi possível extrair o polímero, anteriormente observado no interior das células por microscopia, de forma satisfatória utilizando o clorofórmio. Assim, este resultado torna-se importante, pois a extração de PHB é uma das etapas que mais encarece o processo de produção. O material extraído terá suas características avaliadas por escpectroscopia no infravermelho.