CLONAGEM E EXPRESSÃO DE UMA QUIMERA RECOMBINANTE PARA PRODUÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS ANTI-FIMA DE SALMONELLA ENTERITIDIS

Carla Pohl Sehn (Cenbiot - UFPel); Eduardo de Carli (UFPel); Marcelo Mendonça (Cenbiot - UFPel); Regina Maria Castelli (DCTA/FAEM - UFPel); Rodrigo Correa França (DCTA/FAEM - UFPel); Fabricio Rochedo Conceição (Cenbiot - UFPel); Ângela Nunes Moreira (UFPel); José Antonio Guimarães Aleixo (Cenbiot - UFPel)

Métodos imunoquímicos utilizando anticorpos monoclonais (MAbs) têm sido propostos para a detecção rápida e específica de salmonelas em alimentos. A subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB) é um potente adjuvante, capaz de estimular uma resposta sistêmica e secretória de anticorpos contra antígenos co-administrados ou fusionados. A tecnologia do DNA recombinante nos permite realizar a fusão de adjuvantes imunológicos a antígenos específicos. O objetivo deste trabalho foi clonar e expressar a proteína rLTB-FimA, uma quimera recombinante composta pela fusão da LTB com a subunidade fimbrial principal de Salmonella Enteritidis (FimA), a qual será utilizada na imunização de camundongos para a produção de MAbs. A região codificadora de fimA foi amplificada por PCR e clonada no vetor pAE/ltb, os clones recombinantes foram selecionados em meio LB contendo 100 mg/mL de ampicilina, gerando o vetor pAE/ltb-fimA. E. coli BL21 (DE3) Star, pLysS e Ril foram transformadas por choque térmico com pAE/ltb-fimA e cultivadas em meio LB contendo antibiótico apropriado para cada cepa, até a DO₆₀₀ atingir 0,6-0,8. Neste momento, a expressão da rLTB-FimA foi induzida com 0,5 mM de IPTG durante 3 h em agitador orbital à 37°C e 200 rpm de rotação. A expressão da quimera recombinante foi avaliada através de SDS-PAGE 12% e Western blot utilizando anticorpo monoclonal anti-histidina e anticorpo policlonal anti-LTB. As três cepas de E. coli avaliadas expressaram uma proteína heteróloga de aproximadamente 30 kDa, massa molecular predita para a rLTB-FimA. No Western blot, a quimera foi reconhecida por ambos os anticorpos utilizados. A rLTb-FimA será produzida em larga escala e inoculada em camundongos BALB/c visando a produção de MAbs anti-FimA, que serão utilizados em métodos imunoquímicos de detecção de salmonelas em alimentos.