DETECÇÃO DE CAMPYLOBACTER JEJUNI EM CARCAÇAS DE FRANGO POR PCR EM TEMPO REAL

Kérley Braga Pereira Bento Casaril (UNIOESTE); Gislayne Trindade Villas-bôas (UEL); Giselle Aparecida Costa Nobre (UEL); Francismar Corrêa Marcelino (Embrapa); Tereza Cristina Rocha Moreira de Oliveira (UEL)

Campylobacter é reconhecida mundialmente como a causa mais freqüente de gastrenterite bacteriana e C. jejuni é a espécie mais associada à campilobacteriose humana. A infecção intestinal por C. jejuni também tem sido associada a doenças auto-imunes pós-infecção incluindo, artrite e síndrome de Guillain-Barré. As aves, especialmente frangos são os principais reservatórios naturais de Campylobacter e a carne de frango tem sido o veículo mais freqüente de transmissão ao homem. Os métodos convencionais de isolamento e identificação de Campylobacter em alimentos utilizam meios de enriquecimento seletivo com posterior subcultivo em meios sólidos seletivos, seguindo-se a realização de testes bioquímicos e sorológicos. Devido à rapidez, especificidade e sensibilidade, métodos moleculares, como a reação em cadeia da polimerase (PCR), têm sido padronizados para detecção e identificação de Campylobacter em alimentos. No entanto, necessitam de eletroforese em gel agarose para detecção do produto, demandando tempo e mão-de-obra, além de apresentar interpretação subjetiva em alguns casos. Por essa razão, métodos baseados em PCR em tempo real estão sendo desenvolvidos e propostos para o diagnóstico rápido e sensível da presença de Campylobacter spp em diversos alimentos. O objetivo deste trabalho foi detectar C. jejuni em amostras de carne de frango comercializadas em Londrina/PR utilizando ensaio PCR em tempo real. Amostras de 10 g de pele de frango foram homogeneizadas e enriquecidas em caldo Bolton suplementado por 48 h sob microaerofilia e, em seguida, alíquotas de 1 mL das culturas enriquecidas foram submetidas à extração de DNA por fervura. As reações de amplificação da PCR em tempo real foram realizadas em duplicata em um volume final de 50 μL contendo: 25 μL de Platinum SYBR Green (Invitrogen), 400 nmol do par de iniciadores mapA e 100 nmol de DNA. Dentre os resultados, podem ser destacados: i) o par de iniciadores mapA permitiu detectar e identificar C. jejuni em amostras de carnes de frango ii) todas as amostras de carcaças de frangos adquiridas no comércio de Londrina estavam contaminadas com C. jejuni; iii) o tempo necessário para a obtenção dos resultados foi 48 horas. Estes, entre outros resultados obtidos neste trabalho, representam um avanço no diagnóstico de Campylobacter spp. em comparação com os métodos tradiocionais, cujo tempo médio para confirmar um resultado positivo é cerca de 6 a 7 dias.