ANÁLISE PROTEÔMICA COMPARATIVA DE ISOLADOS AMBIENTAIS DE PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS E SUA RELAÇÃO COM A PATOGENICIDADE

Cristiane Candida do Amaral (UNIFESP); Anderson Messias Rodrigues (UNIFESP); Priscila Oliveira dos Santos (UNIFESP); Alexandre Augusto Sasaki (UNIFESP); Geisa Ferreira Fernandes (UNIFESP); Zoilo Pires de Camargo (UNIFESP)

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose profunda causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A doença é limitada aos países da América Latina e pouco se sabe a respeito de sua ecologia. O processo de infecção e desenvolvimento da PCM depende de fatores de virulência do fungo que interagem com o hospedeiro, interferindo na patogênese da micose. A estrutura antigênica de P. brasiliensis é relativamente complexa e a correlação de alguns desses componentes com a patogenicidade é de grande relevância e pode contribuir para um melhor entendimento da doença. Neste estudo, nosso objetivo é obter painéis bidimensionais de proteínas citoplasmáticas de nove isolados de P. brasiliensis. A expressão protéica será relacionada ao perfil de virulência apresentado por cada isolado quando inoculado em modelo murino experimental, para que possamos averiguar proteínas diferencialmente expressas associadas à virulência fúngica. Para o estudo de virulência, 1x10⁶ leveduras de P. brasiliensis foram inoculadas intratraquealmente em camundongos Balb/c e B10A e o CFU dos órgãos foi determinado. Nossos resultados indicaram que os isolados Bot 1/96, Ibiá T1 e Pb18 foram classificados como virulentos, os isolados Ibiá, e T2 foram intermediários e os isolados T1, Ibiá T2 e Pinguim foram considerados avirulentos. As proteínas citoplasmáticas dos nove isolados foram extraídas, quantificadas pelo método de Bradford e analisadas por géis de SDS-PAGE uni e bidimensionais. Para a análise bidimensional, a focalização isoelétrica foi realizada em fitas IPG pH3-10, 13 cm, e três protocolos de focalização foram testados com aumento gradativo da quantidade total de kVh acumulado. Este procedimento culminou na diminuição de arraste horizontal e aumento significativo do número de spots. A análise inicial do painel bidimensional do isolado Pb18 indicou 470 spots com peso molecular entre 10 a 160 kDa. A análise dos demais isolados está em curso para posterior seleção de spots para espectrometria de massa.