AVALIAÇÃO DA GENOTIPAGEM POR RFLP-IS 6110-5` NA CONFIRMAÇÃO DE CLUSTERS DEFINIDOS PELO MÉTODO PADRONIZADO RFLP-IS 6110-3`EM POPULAÇÃO GEOGRÁFICAMENTE HETEROGÊNEA

Silvia Maria Almeida Machado (LAMICEL/IOC/FIOCRUZ); Roxana Coimbra Brito (HUPE/UFRJ); Maria Helena Féres Saad (LAMICEL/IOC/FIOCRUZ)

O Hospital Geral Pedro Ernesto tem perfil terciário e pertence a área programática (AP) 2, mas recebe pacientes de outras AP e municípios do Rio de Janeiro (RJ), principalmente da baixada fluminense. Estudo retrospectivo de genotipagem em 47,7% das cepas de M. tuberculosis isoladas de pacientes TB notificados no período de 1996-97 neste hospital, foi realizado. O resultado do RFLP-IS6110-3´ mostrou um percentual de clusters de 22,29 % (33/148) dos pacientes, a maioria com dois e o maior cluster com 5 pacientes. Entretanto, considerar estes pacientes como pertencentes a uma mesma cadeia de transmissão recente é prematuro, pois isto é dependente do espaço de tempo das cepas coletadas e da proximidade geográfica dos pacientes. Devido às características do hospital, os clusters foram encontrados em diferentes municípios do RJ e, portanto, para confirmar a clonalidade foi utilizada uma genotipagem secundária em 24/33 clusters, escolhendo-se a seqüência flanqueada pela IS6110-5`. Os resultados esperados seriam clusters com o mesmo número de cópias da IS6110-3`, embora  com fragmentos de diferentes tamanhos. O encontrado, em sua maioria, foi inserção de 2 a 6 cópias, mas que permaneceram nos clusters definidos inicialmente pela IS6110-3`, exceto dois clusters. Um foi subdividido e o outro apresentou uma diferença de 6 cópias. Várias hipóteses podem ser desenhadas para explicar o fato do aparecimento de cópias extras, entre elas: i) o menor tamanho do probe utilizado favoreceria a hibridação com outras seqüências com percentual alto de homologia com o fragmento IS 6110-5`, ii) poderia está acorrendo superposição de fragmentos de IS 6110-3` devido ao posicionamento dos sítios de restrição da PvuII no genoma, levando a geração de fragmentos de tamanhos similares promovendo um perfil de número de cópias menor, iii) simplesmente estas cepas não formavam agrupamentos verdadeiros. Para elucidar esta questão mais estudos devem ser realizados. Mas, considerando que ambas as genotipagens podem ser realizadas sob a mesma membrana e que a maioria dos clusters se mantiveram, esta estratégia pode ser útil na confirmação de cepas clusters albergadas por pacientes de diferentes (ou distantes) áreas geográficas.