AVALIAÇÃO DE BCG RECOMBINANTE CO-EXPRESSANDO LTB EM VACINAÇÃO DE MUCOSA

Andréa da Silva Ramos Rocha (UFPel); Carina Martins de Moraes (UFPel); Odir Antônio Dellagostin (UFPel); Fabrício Rochedo Conceição (UFPel)

A subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB) é um potente adjuvante da imunidade de mucosa que induz forte resposta imune contra antígenos co-administrados ou fusionados. Mycobacterium bovis BCG apresenta propriedades imunoestimulantes, é seguro, estável e capaz de estimular resposta imune celular e humoral contra antígenos heterólogos quando utilizado como vetor vacinal. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da LTB sobre a resposta imune humoral de camundongos vacinados via mucosa com BCG recombinante (rBCG) expressando a região R1 da adesina P97 de Mycoplasma hyopneumoniae sozinha ou fusionada à LTB. Para isso as sequências codificadoras r1 e ltb-r1 foram clonadas no vetor micobacteriano de expressão citoplasmática pUS2000 e introduzidas em BCG mediante eletroporação gerando os vetores recombinantes rBCG/R1 e rBCG/LTB-R1. Para avaliação da imunogenicidade, camundongos isogênicos BALB/c, de ambos os sexos, com idade entre 6 a 8 semanas, foram divididos em seis grupos de sete animais. Doses de 10⁶ rBCG ou BCG Pasteur (controle), em 100 mL de PBS, foram administradas por via nasal ou oral nos dias 0, 21 e 42. Coletas de soro foram realizadas nos dias 0, 21, 42 e 63 para a quantificação de anticorpos séricos totais anti-R1 através de ELISA indireto utilizando microplacas sensibilizadas com rR1. As absorbâncias obtidas foram transformadas em soroconversões dividindo as absorbâncias de cada amostra pela absorbância do dia zero do respectivo grupo. Tanto rBCG/LTB-R1 quanto rBCG/R1 induziram a produção de anticorpos séricos anti-R1 após vacinação de mucosa. No dia 63, rBCG/LTB-R1, administrado por via oral ou nasal, induziu soroconversões de 1,72 e 1,91, respectivamente, enquanto rBCG/R1 1,04 e 1,43, demonstrando o efeito da LTB na vacinação de mucosa com rBCG. A LTB potencializou a resposta imune humoral de camundongos vacinados via mucosa com rBCG.