AVALIAÇÃO DIFERENCIAL DE PROTEÍNAS EXPRESSAS POR S. PYOGENES QUANDO CRESCIDOS EM ALTA (1010UFC/ML) E BAIXA (107 UFC/ML) DENSIDADE POPULACIONAL

Amada Zambrana Coronado (IMPPG/UFRJ); Russolina Benedeta Zingali (IBqM/UFRJ); Bernadete Teixeira Ferreira Carvalho (IMPPG/UFRJ)

O S. pyogenes tem grande importância médica, sendo o principal agente causal de faringite e causador de infecções cutâneas (impetigo, erisipela, celulite), sistêmicas (miosite, fascite necrozante, síndrome do choque tóxico estreptocócico) e de sequelas não-supurativas (febre reumática e glomerulonefrite difusa aguda). Apesar de universalmente sensíveis à penicilina, dados da literatura vem relatando a ocorrência de falhas na terapêutica com essa droga, tanto em quadros de faringite quanto de doenças disseminativas letais. No entanto, foi verificado por nosso grupo que S. pyogenes torna-se fenotipicamente resistente a múltiplas drogas com mecanismos de ação diferentes (penicilina, azitromicina, eritromicina, cefalexina, cefaclor, tetraciclina, cloranfenicol e clindamicina) quando crescido em alta densidade populacional (10¹⁰ UFC/mL), apesar de previamente sensível a todos esses antimicrobianos (por determinação da concentração mínima inibitória). A hipótese de que um mecanismo de efluxo estivesse sendo ativado nos levou a testar a ação de substâncias inibidoras de bombas. Frente ao CCCP e a cada uma das drogas citadas, vimos que houve reversão do fenótipo para clindamicina e cloranfenicol, demonstrando que a expulsão de pelo menos essas duas drogas seria regulada por mecanismo envolvendo bomba de efluxo. Neste estudo demonstramos que a expressão de proteínas totais de S. pyogenes por SDS-PAGE em baixa (10⁷ UFC/mL) e alta (10¹⁰ UFC/mL) densidade populacional tem um perfil protéico diferencial. A extração dessas proteínas foi feita por diferentes protocolos (com utilização de enzimas e por método mecânico). A identificação inicial por espectrometria de massa em aparelho do tipo TOF-TOF das proteínas expressas diferencialmente nas duas condições levou-nos às seguintes identificações: arginina deiminase, ornitina carbamoiltransferase, streptopain, exotoxina pirogênica, Xaa-His dipeptidase, enolase, gliceraldeído 3-fosfato dehidrogenase e l-lactato dehidrogenase, cujas confirmações estão sendo realizadas através de experimentos adicionais. De modo a compreender melhor esses resultados, foram desenhados primers para analisar por RT-PCR a expressão diferencial do RNA correspondente a cada uma dessas proteínas, em baixa e alta densidade populacional. Assim, investigamos o papel destas proteínas  neste novo e fascinante mecanismo de resistência, uma vez que este poderia ter importante significado clínico em situações nas quais a bactéria encontrasse condições favoráveis para uma elevada multiplicação celular, como as observadas em pacientes imunocomprometidos, portadores de imunossupressão ou fazendo uso de imunossupressores.