ADESÃO DE LISTERIA MONOCYTOGENES YFP⁺ ("YELLOW FLUORESCENT PROTEIN") EM CÉLULAS INTESTINAIS DE HUMANOS CACO-2 NA PRESENÇA DE SOBRENADANTE NEUTRALIZADO DE LACTOBACILLUS SAKEI 1

Bruna Carrer Gomes (FCFRP - USP); Marina Rezende Rodrigues (FCFRP - USP); Carlos Artério Sorgi (FCFRP - USP); Lúcia Helena Faccioli (FCFRP - USP); Auro Nomizo (FCFRP - USP); Elaine Cristina Pereira de Martinis (FCFRP - USP)

O epitélio intestinal constitui o primeiro local de contato entre patógenos e as células do hospedeiro. Algumas bactérias láticas são capazes de competir com patógenos na adesão às células intestinais de humanos, modificando o processo de patogenicidade. O sobrenadante neutralizado de L. sakei 1 (SNLS-1) contém uma bacteriocina (4,4 kDa) capaz de inibir a multiplicação in vitro de L. monocytogenes. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a ação do SNLS-1 sobre a adesão de L. monocytogenes YFP⁺ em células intestinais Caco-2. Adicionalmente foi avaliado o efeito modulatório do SNLS-1 sobre a produção de citocinas pró-inflamatórias IL-6 e IL-8 pelas células Caco-2. Após crescimento confluente das células Caco-2 em meio RPMI completo a 37°C, 5% CO₂, as células foram transferidas (10⁵ células/ml) para placas de 24 poços contendo lamínulas de vidro e incubadas por 24 h. Para o teste de adesão as células foram lavadas com RPMI - I (sem soro e sem antibióticos) e os poços preenchidos com RPMI – I contendo diferentes concentrações de SNLS-1 (0, 5, 10, 25, 75 e 100%) e L. monocytogenes YFP⁺ (10⁸ bactérias/ml). Sobrenadante neutralizado de L. sakei ATCC 15521 (SNLS-ATCC) foi utilizado como controle negativo. Após 2 horas de adesão, os meios de cultura de cada poço foram transferidos para microtubos e processados para posterior determinação da concentração de IL-6 e IL-8 por meio de ensaio imunoenzimático. As lamínulas contendo as células Caco-2 foram lavadas e processadas para quantificação da adesão com auxílio de um microscópio ótico. A rede mitocondrial das células Caco-2 foi marcada com "MitoTracker Deep Red 633" para evidenciar o contorno celular e visualização das células aderidas. O material foi analisado em microscópio confocal (laser de argônio 514 nm e Hélio–Neônio 633 nm). Na presença do SNLS-1 foi observado um menor número de L.monocytogenes YFP⁺ aderidas quando comparado ao controle Caco-2 + L. monocytogenes. O SNLS-ATCC não alterou o perfil de adesão de L.monocytogenes YFP⁺ às células Caco-2. Foi observada uma modulação da secreção de IL-8 pelas células Caco-2 de forma dose-dependente da concentração do SNLS-1. Este resultado evidencia o efeito direto do SNLS-1 relacionado à inibição da adesão de L.monocytogenes às células do epitélio intestinal e sugere uma possível ação frente a inflamação induzida por L. monocytogenes.