| Área: Imunologia Clínica e Diagnóstico ( Divisão F ) IMUNOMARCAÇÃO DA SUPERFÍCIE DE LEPTOSPIRA INTERROGANS POR ANTICORPOS MONOCLONAIS PRODUZIDOS CONTRA FRAGMENTO RECOMBINANTE DA REGIÃO REPETITIVA DE LIGA E LIGB
Leonardo Garcia Monte (UFPel); Marcelo Mendonça (UFPel); Everton Fagonde da Silva (UFPel); Luis Antônio Suita de Castro (Embrapa); Fabiana Kömmling Seixas (UFPel); Odir Antonio Dellagostin (UFPel); Fabricio Rochedo Conceição (UFPel); José Antonio Guimarães Aleixo (UFPel)
ResumoA leptospirose é uma zoonose causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira que tem grande importância para a saúde pública em todo o mundo. Atualmente são conhecidos mais de 260 sorovares de leptospiras patogênicas, essa ampla diversidade e as dificuldades encontradas para o diagnóstico clínico-laboratorial precoce e preciso da leptospirose tornam a busca por antígenos da superfície das leptospiras fundamental para a melhor compreensão de sua patogenicidade e para uso em vacinas e ensaios laboratoriais mais eficientes. Recentemente, as adesinas LigA e LigB foram identificadas como importantes fatores de virulência de leptospiras patogênicas por contribuírem na interação com as células da matriz extracelular e fibrinogênio do hospedeiro. Este trabalho teve por objetivo investigar, através da técnica de microscopia imunoeletrônica, se dois anticorpos monoclonais (MAbs) produzidos contra um fragmento recombinante da região idêntica de LigA e LigB reagem com seus epitopos nas duas proteínas expostas em sua forma nativa na superfície de L. interrogans. Cultivos das cepas patogênica de baixa passagem L. interrogans L1-130 e não-patogênica L. patoc Patoc I contendo 108 células/mL foram incubadas inicialmente com os MAbs e posteriormente com anticorpos de cabra anti-imunoglobulinas de camundongo conjugados à partículas de ouro, ambos por um período de 12h a 4°C. O complexo antígeno:anticorpo foi fixado em solução contendo glutaraldeído 6%, paraformaldeído 6% e cacodilato de sódio 0,1M a 4°C por 1h. Foram realizadas três lavagens com cacodilato de sódio 0,1 M, contendo sacarose 0,2M, para a posfixação em tetróxido de ósmio 1%. A seguir, as amostras foram polimerizadas em resina epoxy e seccionadas a 60 nanômetros para a observação em microscópio eletrônico de transmissão. O ensaio realizado com ambos os MAbs revelou um expressivo conteúdo de anticorpos somente sobre a superfície da cepa patogênica. Este resultado comprova que os MAbs reagem com as proteínas nativas e que, portanto, constituem importante ferramenta para o estudo da função das proteínas Lig e para o desenvolvimento de vacinas e testes diagnósticos que possam confirmar o estágio inicial da leptospirose.
Palavras-chave: Anticorpo monoclonal, Leptospira interrogans, Leptospirose, Microscopia imunoeletrônica, Proteína recombinante |