BIOPROSPECÇÃO DE ESTIRPES FORMADORAS DE ENDOSPOROS E PRODUTORAS DE CICLODEXTRINAS EM AMOSTRAS DE SOLO DE CERRADO E SOLO DE FLORESTA

Simone de Carvalho Siqueira (UFRJ); Renata Estebanez Vollú (UFRJ); Fábio Faria da Motta (UFRJ); Lucy Seldin (UFRJ)

A capacidade de produzir ciclodextrinas (CDs) é restrita a um pequeno grupo de bactérias, incluindo estirpes pertencentes aos gêneros Bacillus e Paenibacillus. A síntese de CDs a partir de moléculas de amido é realizada através da ação de uma enzima extracelular, a ciclodextrina glicosiltransferase (CGTase). Esse estudo teve como objetivo realizar a bioprospecção de estirpes formadoras de esporos e produtoras de CDs em amostras de solo de cerrado e floresta. Foram isoladas 120 estirpes, sendo metade delas do solo de cerrado e a outra metade do solo de floresta. Todas as estirpes foram testadas quanto à produção de amilases e de α- e γ-CDs. Dentre elas, 48 estirpes mostraram-se produtoras de amilase. Dessas 48, 44 (91,6%) estirpes (21 e 23 estirpes isoladas dos solos de floresta e de cerrado, respectivamente) produziram α- e γ-CDs. O DNA das estirpes foi extraído e submetido à reação de PCR utilizando-se o iniciador BOXA1R. Foram observados 4 grupos no dendrograma construído com base nos perfis genotípicos, onde as estirpes isoladas do solo de cerrado se agruparam e ficaram separadas das estirpes do solo de floresta. A partir do perfil gerado no dendrograma e da avaliação da produção de α- e γ-CDs em placa, foram selecionadas 6 estirpes com potencial para a produção de ciclodextrinas. As estirpes escolhidas foram caracterizadas fenotipicamente através do teste de Gram para observação da morfologia celular e dos esporos. Foram realizados testes bioquímicos clássicos e API 50CH através dos quais foi possível identificar a estirpe F20 como pertencente à espécie Paenibacillus polymyxa, F21 como Bacillus megaterium e C11 como B. mycoides. Porém os resultados dos testes bioquímicos não foram suficientes para identificar as estirpes F37, CH3 e F8. Assim, o DNA de todas as 6 estirpes foi amplificado por PCR utilizando-se iniciadores baseados no gene que codifica o 16S rRNA e os produtos gerados foram clonados e sequenciados. Após análise filogenética, as estirpes F20 e F21 foram confirmadas como pertencentes a P. polymyxa e a B. megaterium, respectivamente. Entretanto, as outras 4 estirpes (C11, CH3, F8, e F37) foram identificadas somente como pertencentes aos gêneros: Bacillus sp. – C11, CH3 e F8; Paenibacillus sp. – F37. Pela sua importância biotecnológica, novos testes estão sendo realizados para melhor caracterizar essas estirpes produtoras de CDs.