PRODUÇÃO DE LIPASES POR CANDIDA LIPOLYTICA NA PRESENÇA DE GORDURA ANIMAL E MILHOCINA

Daniela Silva Gomes (UNICAP); Danyelle Khadydja Felix dos Santos (UNICAP); Leonie Asfora Sarubbo (UNICAP); Alexandra Amorim Salgueiro (UNICAP)

As lipases são hidrolases que apresentam ação eficaz em moléculas de óleos e gorduras. Constituem um dos grupos de biocatalizadores mais importante em aplicações industriais e tecnológicas cuja demanda mundial é de aproximadamente 10 % das enzimas utilizadas em biotransformações. Resíduos industriais têm sido utilizados na formulação de meios de cultivo, como nutrientes alternativos de baixo custo por favorecerem o crescimento microbiano. Este trabalho investigou a produção de lipases por Candida lipolytica cultivada em resíduos industriais, visando à aplicação na área ambiental. A partir de uma cultura pura da levedura, o inóculo foi cultivado no caldo do “yeast mold agar” (YMA - extrato de levedura 0,3 %, extrato de malte 0,3 %, D-glicose 1 %, triptona 0,5 %), a pH 5,0, incubado a 150 rpm e a 27 °C durante 24 horas. A produção de lipases foi investigada em duplicata a partir da inoculação de 10⁴ células/mL na presença de 5 % de gordura animal e 2,5 % de milhocina em frascos de Erlenmeyer de 500 mL com volume útil de 100 mL a pH 5,0. Os frascos foram mantidos sob agitação de 200 rpm durante 7 dias, à temperatura de 27 ºC. Durante o cultivo, amostras do líquido metabólico foram retiradas, centrifugadas e os sobrenadantes resfriados. O pH foi determinado por potenciometria. A atividade lipolítica foi quantificada espectrofotometricamente a 410 nm, utilizando paranitrofenilpalmitato (pNPP) na presença de goma arábica, Triton X-100 e tampão tris-HCl 50 mM pH 8,0. Durante o cultivo da levedura, o pH variou de 5,0 (inicial), para pH 5,7 com 6 dias, atingindo o valor máximo de pH 6,1 com 7 dias de cultivo. A produção de lipases oscilou durante o experimento. A atividade aumentou partir do primeiro dia de cultivo, atingindo no terceiro dia, 7,6 U/L cujo valor decresceu até 4,0 U/L no quinto dia; sendo determinado o valor máximo médio de 12,7 UI/L com sétimo dias de cultivo. Os resultados obtidos demonstram que o valor nutritivo da gordura bovina e da milhocina possibilitam o crescimento e a produção de lipases por C. lipolytica, permitindo o reaproveitamento desses resíduos e diminuindo os custos de produção de enzimas por microrganismos.