PRODUÇÃO DE LIPASE POR FERMENTAÇÃO EM ESTADO SÓLIDO EM RESÍDUOS AGROINDUSTRIAIS

Gilberto Victor Coradi (UNESP); Thaís Yumi Shinya (UNESP); Valéria Marta Gomes de Lima (UNESP)

Lipases (EC 3.1.1.3) catalisam hidrólise ou síntese de acilgliceróis de cadeia longa e devido às suas propriedades biocatalíticas há muito interesse na aplicação industrial dessas enzimas, entre elas de detergente, alimento e biodiesel. Enzimas são rotineiramente produzidas por fermentação submersa, entretanto, a fermentação sólida é promissora, principalmente quando resíduos agroindustriais constituem a fonte do substrato. O trabalho teve como objetivo selecionar substratos agroindustriais para produção de lipases por Trichoderma sp e Fusarium sp, isolados da Mata Atlântica. Utilizou-se como inóculo 1mL de suspensão de esporos de Trichoderma sp (10⁸ esporos/mL) ou 1g de grãos de trigo colonizados com Fusarium sp. Foram utilizados como substratos 10g de resíduos agroindustriais isolados ou em misturas: torta de mamona (TM; proporção 1:1), tortas de mamona e mandioca (TMM; 1:2), torta de mamona e palha de milho (TMP; 1:2) e tortas de mamona e cana-de-açúcar (TMC; 1:2). Adicionou-se ao substrato tampão fostato 0,1M pH 7,0 de modo a obter 55% de umidade e 1% (m/v) de óleo de oliva. Os cultivos foram mantidos a 28°C e um frasco era retirado a cada 24h. A enzima foi extraída adicionando-se 40mL de solução de NaCl 1% (m/v), seguido por agitação (180rpm, 30min, 28ºC), prensagem e centrifugação (3000rpm, 15min). O sobrenadante foi coletado e a atividade enzimática foi acompanhada pela hidrólise do palmitato de p-nitrofenila (pNPP), a 37°C por 2min  a 410nm. Uma unidade de atividade enzimática foi definida como a liberação de 1µmol.min^-1 de pNP e expressa como unidade de atividade enzimática por grama de substrato seco. A atividade enzimática máxima foi obtida depois de 120h de fermentação para ambos os fungos. No caso do Trichoderma sp, a maior atividade foi obtida usando-se TMM (3,4U/gss), seguida por TMC (3,32U/gss). Já no caso do Fusarium a maior atividade foi obtida usando-se a TMC (17,56U/gss), seguida por TM (5,32U/gss). Os bons resultados apresentados com os resíduos de mamona e cana de açúcar, com ambos os fungos, podem estar relacionados ao conteúdo de lipídeo residual presente nestes compostos. Apesar de ter sido acrescentado 1% de óleo de oliva em todos os experimentos, a análise da composição centesimal destes substratos revelou a presença significativamente maior de lipídeos nas tortas de cana de açúcar e mamona (3,52% e 1,15%, respectivamente) do que na palha de milho e mandioca (0,1%). Com base nesses resultados pretende-se fazer nova fermentação usando apenas torta de cana para verificar se há um aumento da produção de lipases por ambos os fungos.