OTIMIZAÇÃO DAS CONDIÇÕES DE CULTIVO PARA A PRODUÇÃO DE TANASES PELO FUNGO TERMOTOLERANTE ASPERGILLUS PHOENICIS EM FERMENTAÇÃO SUBMERSA (FSBM)

Alana Jacomini Riul (UNESP); Heloísa Bressan Gonçalves (UNESP); João Atílio Jorge (USP); Luis Henrique Souza Guimarães (USP)

As tanases (tanino acil hidrolases, EC 3.1.1.20), hidrolisam ligações ésteres e depsídicas de taninos hidrolisáveis, produzindo glicose e ácido gálico, o qual tem importância na indústria farmacêutica e química. Os microrganismos são importantes fontes de obtenção destas enzimas, destacando-se entre eles os fungos filamentosos, como os dos gêneros Aspergillus e Penicillium. Desta forma o objetivo deste trabalho foi otimizar a produção de tanases por Aspergillus phoenicis em fermentação submersa (FSbm). O fungo foi mantido em FSbm em meio Khanna, suplementado com diferentes fontes de carbono, pH inicial 6,0 e incubado à 40ºC, sob agitação orbital (100 rpm), por 72 horas. A atividade tanásica (U/mL) foi determinada usando-se metil galato 0,2% como substrato em tampão acetato de sódio 100mM, pH 5,0 conforme descrito por Sharma et al. (2000). Proteínas foram quantificadas segundo a metodologia descrita por Lowry et al. (1951). Entre as diferentes fontes de carbono testadas a maior produtividade tanásica foi obtida com o ácido tânico na concentração de 2%. Foi observado que fontes de nitrogênio orgânicas (peptona e extrato de levedura) e inorgânicas (sulfato de amônio) adicionadas ao meio de cultivo proporcionaram o aumento da produção de tanases quando adicionadas em baixas concentrações, com aumento de 169% para a forma extracelular na presença de 0,75%(p/v) de peptona e de 45% para a intracelular na presença de 0,1%(p/v) de sulfato de amônio. Já com a adição de 5%(p/v) de fosfato de potássio a produção enzimática foi diminuída cerca de 74% e 16%, respectivamente, para as formas extra e intracelulares. Quando analisada a influência dos produtos de hidrólise do ácido tânico, ou seja, da glicose e do ácido gálico, adicionados ao meio de cultivo sobre a produção enzimática, foi observado um pequeno aumento da mesma, para ambas as formas tanásicas, em baixas concentrações de glicose. Já na presença de ácido gálico, a produção de tanases intracelulares foi inibida em todas as concentrações testadas e a extracelular totalmente na presença de 5%(p/v). A temperatura ótima para a atividade enzimática foi de 40ºC para ambas as formas tanásicas e o pH ótimo de atividade foi 5,0 para a forma extracelular e 6,0 para a intracelular. Em conclusão, o fungo A. phoenicis foi um bom produtor de tanases em FSbm na presença de ácido tânico como fonte de carbono. Além disso, a enzima estudada teve sua síntese aumentada na presença de fontes de nitrogênio, dados estes que merecem maior investigação, sendo atrativos para possíveis aplicações biotecnológicas. Apoio financeiro: CAPES, FAPESP.