PRODUÇÃO DE SORO ANTI-PBP2A E RECONHECIMENTO DE PBP2A EM AMOSTRAS DE STAPHYLOCOCCUS SPP UTILIZANDO A TÉCNICA DE WESTERN BLOT.

Eduarda Vanessa Cavalcante Mangueira (CPqAM/Fiocruz); Wagner Luis Mendes de Oliveira (CPqAM/Fiocruz); Marinalda Anselmo Vilela (HUOC/UPE); Osvaldo Pompílio de Melo Neto (CPqAM/Fiocruz); Alzira Maria Paiva de Almeida (CPqAM/Fiocruz); Nilma Cintra Leal (CPqAM/Fiocruz)

Microorganismos do gênero Staphylococcus tornaram-se um desafio às novas terapias antimicrobianas, devido à aquisição de mecanismos de resistência aos agentes terapêuticos utilizados no combate às infecções estafilocócicas. O mecanismo de resistência decorrente da produçãode uma transpeptidase, PBP2a, com baixa afinidade a antibióticos beta lactâmicos e derivados, está associado à aquisição do gene mecA, regulado pelos gene mecR1 e mecI, indutor e repressor respectivamente, em amostras de Staphylococcus spp. Contudo, alguns isolados clínicos, mesmo mecA positivos, são sensíveis à oxacilina e cefoxitina sendo denominados Staphylococcus pré-meticilina resistente (pré-MRS). Esse trabalho teve como objetivo produzir soro policlonal anti-PBP2a para reconhecimento da expressão da proteína PBP2a em amostras de Staphylococcus spp resistentes e pré-MRS. O fragmento do gene mecA, foi amplificado por PCR e clonado no vetor plasmidial pET-21a. Células competentes de Escherichia coli da linhagem DH5a foram transformadas com as construções plasmidiais mecA/pET-21a e o DNA extraído posteriormente pelo método de minipreparação para confirmação da clonagem por sequenciamento. As construções confirmadas foram transformadas em céluas de E. coli da linhagem BL21Star e posterior expressão induzida por IPTG. A proteína recombinante foi recuperada do gel de poliacrilamida, purificada e utilizada para imunização de coelhos. O soro foi testado, reconhecendo especificamente, através do ensaio de Western blot, a PBP2a, em extrato protéico de cepa de referência de S. aureus resistente. Este soro será uma ferramenta importante na análise de cepas pré-MRS. Nossa perspectiva é induzir a resistência nessas amostras com oxacilina e observar se ocorre a produção da PBP2a e qual evento genético teria sido responsável por essa modificação, que converte isolados pré-MRS em resistentes.