ANÁLISE DA EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS DE ESTRESSE REGULADAS PELOS SISTEMAS HRCA E CTSR EM STAPHYLOCOCCUS SAPROPHYTICUS.

Lorayne Lauria de Oliveira (UFRJ)

Staphylococcus saprophyticus é um importante patógeno responsável por infecções comunitárias do trato urinário (UTIs), em mulheres jovens. Todos os organismos apresentam a expressão de proteínas de choque térmico (HSPs) DnaK, GroEL e diversas Clps. Estas proteínas têm função de chaperonas moleculares e atuam no enovelamento de proteínas recém sintetizadas ou desnaturadas por agentes estressantes, podendo participar da degradação das mesmas. As HSPs promovem a habilidade da célula em resistir a condições ambientais adversas e parecem estar envolvidas na patogênese bacteriana. As proteínas DnaK (HSP70) e GroEL (HSP60) são reguladas pelo sistema HrcA e as proteínas Clps (HSP100) pelo sistema CtsR. Ambos repressores se ligam às regiões promotoras em sequências específicas CIRCE (HrcA) e CtsR box (CtsR). Nosso trabalho tem por objetivo analisar a expressão das HSPs reguladas pelos sistemas HrcA e CtsR em S. saprophyticus. Foi observado um crescimento celular expressivo a 37ºC e uma redução do mesmo a 42º, 45º e a 48ºC, após oito horas de incubação. Após duas horas de incubação em temperaturas supra-ótimas, células viáveis foram ainda detectadas a 48º e 50ºC, não tendo sido observado nenhum crescimento a 52º e 55ºC. Utilizando-se a ferramenta Blast  observou-se que as sequências das proteínas DnaK, GroEL e Clps, obtidas do genoma de S. saprophyticus ATCC15305 apresentavam alto grau de identidade com àquelas de outras espécies do gênero Staphylococcus. Os operons dnaK (hrcA, grpE, dnaK, dnaJ) e groE (groES, groEL) apresentam a sequência CIRCE em seus promotores conforme descrito em outros micro-orgarnismos. No caso do sistema de regulação CtsR foi observado que os genes clpB, clpC e clpP e o operon dnaK apresentam a sequência CtsR box em suas regiões promotoras. Foi avaliada a indução de DnaK, GroEL e ClpB através da marcação isotópica ³⁵S-Met e SDS-PAGE. Para avaliar os níveis dos mRNAs de hrcA e ctsR foram realizados ensaios de PCR em tempo real (qRT-PCR) nas temperaturas supra-ótimas de 42º, 45º e 48ºC, utilizando a temperatura de 37ºC como controle e o gene rRNA16S como padrão interno. Observou-se que o choque térmico induz um aumento na expressão dos mRNAs em todas as temperaturas, sendo geralmente maior a indução para hrcA. Os resultados obtidos contribuirão para um esclarecimento da regulação da resposta ao choque térmico HrcA e CtsR em S. saprophyticus.