| Área: Microbiologia Geral ( Divisão H ) OBTENÇÃO DE BOVICINA HC5 E NISINA POR DIFERENTES MÉTODOS DE EXTRAÇÃO
Anna Gabriella Guimarães Oliveira (UFV); Aline Dias Paiva (UFV); Fernanda Godoy Santos (UFV); Hilário Cuquetto Mantovani (UFV)
ResumoAs bacteriocinas têm sido estudadas
principalmente devido ao seu potencial de aplicação na indústria de alimentos,
na medicina e na agropecuária. Bovicina HC5, produzida por Streptococcus bovis HC5, apresenta
estabilidade ao calor, baixo pH e amplo espectro antimicrobiano, como a
nisina, que é aprovada e utilizada como conservante de alimentos em vários
países. O objetivo deste trabalho foi comparar a eficácia de diferentes métodos
de extração sobre a liberação, pureza do extrato e purificação de bovicina HC5
e nisina. Para extração do peptídeo foram utilizados diferentes sais (NaCl,
KCl, MgCl2 e CaCl2
), em concentrações (0, 10, 100 e 1000 mM) e temperaturas (4 , 25 e 100 ºC)
variadas. A atividade (AU/mL) da bacteriocina extraída foi avaliada pelo método
de difusão em ágar com e sem adição de Tween 80 as amostras e os resultados
foram analisados pelo Teste de Tukey a 1 % de significância. A pureza e
rendimento dos extratos foram avaliados pelas técnicas de cromatografia líquida
de alta pressão (HPLC), por eletroforese em gel de SDS-Tricina e pela análise
de proteína pelo método de Bradford.
As extrações de bovicina HC5 e nisina na temperatura de 100 ºC apresentaram significativamente
maior atividade (AU/mL). A análise de proteína das amostras purificadas de
bovicina HC5 e nisina revelou maior concentração de proteínas nas extrações
obtidas a 100 ºC e os perfis cromatográficos obtidos pelo HPLC demonstraram
maior absorbância no pico referente à bacteriocina. Contudo a análise do gel de
SDS-Tricina desses extratos demonstrou a presença de outras bandas, indicando a
presença de impurezas. Não houve diferença significativa na eficiência de
extração entre os sais e a maior atividade das bacteriocinas foi obtida com os
sais monovalentes a 100 mM
e os divalentes a 100 e 1000
mM. A adição de Tween 80 às diluições das amostras de
bovicina HC5 e nisina provocou aumento das atividades do extrato. A partir dos
resultados obtidos conclui-se que a temperatura de 100 ºC parece ser mais
eficiente para extração de bacteriocinas, no entanto outras proteínas são extraídas.
A presença de Tween 80 aumentou a atividade das bacteriocinas. (CNPQ)
Palavras-chave: BOVICINA HC5, NISINA, EXTRAÇÃO, OBTENÇÃO |