CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA E GENOTÍPICA DE ESTIRPES BACTERIANAS ISOLADAS DE SOLO DE UM CAMPO PETROLÍFERO TERRESTRE NO NORDESTE DO BRASIL

Natália de Castro Longo (UFRJ); Vanessa Marques Alvarez (UFRJ); Lucy Seldin (UFRJ)

O petróleo é uma das fontes de energia mais exploradas no mundo. Durante os processos de extração, refino e transporte podem ocorrer acidentes, causando a poluição do meio ambiente. A biorremediação tem sido reconhecida como uma tecnologia promissora para lidar com ambientes poluídos por contaminantes orgânicos, por isso, a prospecção e o estudo de microrganismos capazes de degradar o petróleo são importantes. Um fator agravante destes derrames é a água de produção utilizada na recuperação secundária do petróleo, que apresenta alta salinidade. A partir de células experimentais (situadas em um campo petrolífero no nordeste do Brasil), construídas para simular in situ a contaminação do solo com óleo e com óleo e água de produção, foram isoladas 16 estirpes bacterianas degradadoras de petróleo, halotolerantes e morfologicamente distintas. Para melhor caracterizá-las, foram realizados testes fenotípicos (degradação de óleo cru, crescimento com NaCl e coloração de Gram) e  genotípicos (Análise de Restrição do RNA ribossomal Amplificado - ARDRA - e sequenciamento do gene que codifica o 16S rRNA). Como resultado, foi observado que todas as estirpes foram capazes de degradar óleo cru e de crescer em concentrações de, pelo menos, 10% de NaCl. Após a caracterização morfotintorial, 15 estirpes foram classificadas como Gram-positivas e 1 como Gram-negativa. O DNA total das 16 estirpes foi extraído e o gene rrs foi amplificado via PCR. Os produtos gerados foram submetidos à ARDRA e com o resultado obtido as estirpes foram agrupadas em 15 grupos geneticamente distintos. O produto de PCR de um representante de cada grupo foi sequenciado, os gêneros encontrados foram: Brevibacillus, Halobacillus, Bacillus, Oceanobacillus, Virgibacillus, Brevibacterium e Micrococcus. Parte do gene que codifica a enzima alcano monoxigenase (alkB) foi detectado em 10 das 16 estirpes através de homologia de DNA (dot blotting), utilizando um produto de PCR resultante da amplificação do gene alkB de uma estirpe de Rhodococcus sp. como sonda. Quando o DNA dessas 10 estirpes foi digerido com EcoRI, transferido para suporte sólido e hibridizado (Southern blotting) com a mesma sonda, vários padrões de hibridização foram observados e utilizados para agrupar as estirpes em questão. Os resultados obtidos sugerem que o gene alkB está distribuído de maneira não uniforme entre as estirpes estudadas.