CARACTERIZAÇÃO DA PROTEÍNA GLICERALDEÍDO-3-FOSFATO DESIDROGENASE DO FUNGO METARHIZIUM ANISOPLIAE.

Leonardo Broetto (UFRGS); Melissa Landell (UFRGS); Juliana Beringer (UFRGS); Barbára Kunzler (UFRGS); Ângela Junges (UFRGS); Juliano Tomazzoni Boldo (UFRGS); Marilne Henning Vainstein (UFRGS); Augusto Schrank (UFRGS)

Glicerladeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH, EC 1.2.1.12) é uma enzima clássica da via da glicólise / gliconeogênese, catalisando a fosforilação oxidativa do substrato gliceraldeído-3-fosfato em 1,3-bifosfoglicerato na presença de NAD+ e fosfato inorgânico. GAPDH desempenha funções importantes em diversoso processo celulares, apresentando outras funções e outras sub localizações celulares não relacionadas à glicólise em uma grande variedade de organismos e microrganismos. Neste trabalho nós descrevemos a análise do perfil eletroforético bidimensional da proteína GAPDH de Metarhizium anisopliae, agente biocontrolador de um amplo espectro de artrópodes, utilizando o anti corpo policlonal  contra GAPDH de Paracoccideioide brasiliensis para detecção específica da proteína com o intuito de identificar as suas outras duas possíveis isoformas, uma vez que a sua forma majoritária teve sua identificação já confirmada, para GAPDH, por espectrometria de massas. Foi realizada a expressão heteróloga de GAPDH recombinante de M. anisopliae em Escherichia coli e sua purificação para geração de anti corpos policlonais mais específicos. E afim de localizar a proteína na célula de M. anisopliae, experimentos de imunofluorescência utilizando o anti corpo contra GAPDH de P. brasiliensis foram realizados, e revelaram a presença de GAPDH na superfície da célula fúngica juntamente com a sua presença citosólica. Os experimentos realizados nesta etapa têm como objetivo identificar as outras duas possíveis isoformas de GAPDH de M. anisopliae, totalizando três isoformas e localizar a proteína em uma região celular alternativa a já descrita localização citosólica. Em união estes dados fortalecem a hipótese de que existe uma ou mais de uma outra função para a GAPDH de M. anisopliae.

Órgãos de Fomento: CNPq, FAPERGS, Projeto Rede Sul de Análise de Genomas, PROCAD, CAPES.